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DNA连接酶是一种能够催化相邻DNA的3’-OH和5’-磷酸基末段形成磷酸二酯键,并且把两段DNA拼接起来的核酸酶。不同生物体内具有不同种类的DNA连接酶,可以连接黏性末端或者平末端,连接过程是通过DNA连接酶把ATP或者NAD的磷酸腺苷接到DNA的缺口处,形成磷酸二酯键,在释放出一个磷酸腺苷完成DNA的连接过程,相对而言对平末端的连接效率较低。