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摘 要：本文采用高校液相测定了琥珀消石颗粒中阿魏酸的含量，固定相为：依利特hypersil BDS C18 色谱柱（4.6*250*5μm），甲醇-水-冰乙酸（30∶69：1）为流动相，检测波长为322nm；阿魏酸在4～32μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。阿魏酸的平均回收率为99.3%。本方法是一种简便、准确，可用于琥珀消石颗粒含量的测定。
关键词：琥珀消石颗粒；含量；测定
琥珀消石颗粒为棕黄色的颗粒；味甜、微苦。琥珀消石颗粒由赤小豆、当归、琥珀、海金沙、金钱草、鸡内金、蒲黄、牛膝组成。琥珀消石颗粒具有清热利湿，通淋消石的功效。琥珀消石颗粒主要用于石淋、血淋、泌尿系统结石等。当归具有补血、活血、调经止痛、润燥滑肠的功效。《注解伤寒论》记载：“脉者血之府，诸血皆属心，凡通脉者必先补心益血，故张仲景治手足厥寒，脉细欲绝者，用当归之苦温以助心血。”当归主要用于月经不调、肌肤麻木、赤痢后重、痛经、崩漏、跌扑损伤等[1-4]。当归为琥珀消石颗粒主要成分之一。当归含有豆甾醇（Stigmasterol）、α-雪松烯（α-Cedrene）、藁本内酯（Ligustilide）、豆甾醇-D-葡萄糖甙（Stigma- sterol-D-glucoside）、阿魏酸等成分[5-6]。本文用高效液相法对琥珀消石颗粒中的阿魏酸的进行了含量测定。
1 仪器与试药
DL-820E超声波清洗机（上海高创化学科技有限公司）； TG16-WS台式高速离心机（湘仪离心机仪器有限公司）；DGLC双梯度液相色谱（苏州市莱顿科学仪器有限公司）；FA1004万分之一分析天平（上海书培实验设备有限公司）；XYJ-H帕恩特实验室中央超纯水系统（北京湘顺源科技有限公司）；PHB恒温水浴箱（天津因赛科技发展有限公司）；CO-1000型色谱柱温箱（武汉恒信世纪科技有限公司）。盐酸（杭州科博仪器有限公司）、乙醚（杭州科博仪器有限公司）、甲醇（国药集团化学试剂有限公司）、冰乙酸（上海跃胜贸易有限公司）、乙腈（上海亨代劳生物有限公司）、磷酸（杭州科博仪器有限公司）。
2 含量测定
2.1色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[7-10]。色谱柱为依利特hypersil BDS C18 色谱柱（4.6*250*5μm）；甲醇-水-冰乙酸（30∶69：1）为流动相；检测波长为322nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按阿魏酸峰计算应不得低于2000。
2.2供试品溶液的制备
取琥珀消石颗粒适量，研细，精密称定，置50 ml具塞锥形瓶中，加1% NaOH溶液20毫升密塞，摇匀，避光，放置48 h。离心，取上清液，用1 mol/L的盐酸调pH 3～5，有沉淀生成。离心，取上清液，用乙醚萃取3次，每次10毫升。干燥沉淀，加乙醚振摇3次，每次10毫升，滤过，合并滤液，避光，低温干燥，用70%甲醇定容至10 毫升棕色容量瓶中，过0.45 μm的滤膜，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取阿魏酸对照品约5mg，置50毫升棕色容量瓶中，用甲醇超声波振荡溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用甲醇超声波振荡溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含阿魏酸10μg）。
2.4 阴性干扰试验：按方中比例取赤小豆、琥珀、海金沙、金钱草、鸡内金、蒲黄、牛膝等药材，按照制备工艺方法制成阴性制剂，按2.3项下方法制成供试品溶液，按色谱条件测定。结果表明：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与阿魏酸相同保留时间处不存在吸收峰，说明此方法具有较强的专属性。
2.5标准曲线的制备
制备浓度为4、8、16、20、24、28、32μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，阿魏酸对照品在4～32μg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6精密度试验
精密吸取阿魏酸对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.35%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批琥珀消石颗粒样品6份，分别制备成供试品，按色谱条件测定含量，并计算样品的RSD值为0.53%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
取供试品溶液，分别在0，1，2，3，4h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品阿魏酸峰面积积分值的RSD为0.65%。结果表明阿魏酸至少在4h内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的阿魏酸对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.66%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定琥珀消石颗粒三批样品中阿魏酸的含量，结果三批样品的含量分别为71μg/g、73μg/g、72μg/g。
3 讨论
3.1 流动相的选择
分别考察甲醇-水-冰乙酸（30∶69：1），乙腈-甲醇-冰乙酸-水（15：15∶3∶67），甲醇-冰乙酸-水（30∶3∶67），甲醇-水-磷酸（30∶70：0.2），乙腈-甲醇-水 （20∶10：70）不同比例的流动相，结果以甲醇-水-冰乙酸（30∶69：1）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-水-冰乙酸（30∶69：1）为流动相。
3.2 检测波长的选择
制备阿魏酸对照品稀释液，依照紫外分光光度法测定阿魏酸在322nm处有最大吸收峰，故选用322nm为检测波长。
琥珀消石颗粒原有质量标准只有性状、鉴别、溶化性等检验项目，没有含量测定。本实验对琥珀消石颗粒中阿魏酸的含量进行测定，为今后对琥珀消石颗粒的质量标准修订提供依据。本实验方法是一种简便、准确、安全的测定琥珀消石颗粒含量的方法。琥珀消石颗粒中阿魏酸的含量为不少于70μg/g。
参考文献
[1]邓永健，郭志伟，王萌.当归的化学成份及其药理作用研究进展[J].新疆中医药，2006（05）.
[2]韦玮，龚苏晓，张铁军，胡静.当归多糖类成分及其药理作用研究进展[J].药物评价研究，2009（02）.
[3]倪竹南，吕圭源，楼招欢，吴人杰.当归挥发油化学成分和药理作用研究进展[J].中国中医药信息杂志，2007（07）.
[4]刘雪东，李伟东，蔡宝昌.当归化学成分及对心脑血管系统作用研究进展[J].南京中医药大学学报，2010（02）.
[5]夏泉，张平，李绍平，王一涛.当归的药理作用研究进展[J].时珍国医国药，2004（03）.
[6]康军.当归化学成分及其药理作用研究进展[J].医药产业资讯，2005（23）.
[7]刘圆，贾敏如.RP-HPLC测定川芎、奶芎和山川芎中阿魏酸的含量[J].华西药学杂志，2004（05）.
[8]辛宁，罗翠娥，莫燕.不同等级当归的阿魏酸含量比较[J].中药材，2001（04）.
[9]季芳，吕雪芳，阮琴，何秋华，何新霞.川芎中阿魏酸的HPLC测定[J].中国现代应用药学，2003（02）.
[10]屈扬，黄熙，任平，张莉，张珊红，杨喜忠.HPLC法测定含川芎当归的常见煎剂中阿魏酸的含量[J].中草药，2004（10）.
关键词：琥珀消石颗粒；含量；测定
琥珀消石颗粒为棕黄色的颗粒；味甜、微苦。琥珀消石颗粒由赤小豆、当归、琥珀、海金沙、金钱草、鸡内金、蒲黄、牛膝组成。琥珀消石颗粒具有清热利湿，通淋消石的功效。琥珀消石颗粒主要用于石淋、血淋、泌尿系统结石等。当归具有补血、活血、调经止痛、润燥滑肠的功效。《注解伤寒论》记载：“脉者血之府，诸血皆属心，凡通脉者必先补心益血，故张仲景治手足厥寒，脉细欲绝者，用当归之苦温以助心血。”当归主要用于月经不调、肌肤麻木、赤痢后重、痛经、崩漏、跌扑损伤等[1-4]。当归为琥珀消石颗粒主要成分之一。当归含有豆甾醇（Stigmasterol）、α-雪松烯（α-Cedrene）、藁本内酯（Ligustilide）、豆甾醇-D-葡萄糖甙（Stigma- sterol-D-glucoside）、阿魏酸等成分[5-6]。本文用高效液相法对琥珀消石颗粒中的阿魏酸的进行了含量测定。
1 仪器与试药
DL-820E超声波清洗机（上海高创化学科技有限公司）； TG16-WS台式高速离心机（湘仪离心机仪器有限公司）；DGLC双梯度液相色谱（苏州市莱顿科学仪器有限公司）；FA1004万分之一分析天平（上海书培实验设备有限公司）；XYJ-H帕恩特实验室中央超纯水系统（北京湘顺源科技有限公司）；PHB恒温水浴箱（天津因赛科技发展有限公司）；CO-1000型色谱柱温箱（武汉恒信世纪科技有限公司）。盐酸（杭州科博仪器有限公司）、乙醚（杭州科博仪器有限公司）、甲醇（国药集团化学试剂有限公司）、冰乙酸（上海跃胜贸易有限公司）、乙腈（上海亨代劳生物有限公司）、磷酸（杭州科博仪器有限公司）。
2 含量测定
2.1色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[7-10]。色谱柱为依利特hypersil BDS C18 色谱柱（4.6*250*5μm）；甲醇-水-冰乙酸（30∶69：1）为流动相；检测波长为322nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按阿魏酸峰计算应不得低于2000。
2.2供试品溶液的制备
取琥珀消石颗粒适量，研细，精密称定，置50 ml具塞锥形瓶中，加1% NaOH溶液20毫升密塞，摇匀，避光，放置48 h。离心，取上清液，用1 mol/L的盐酸调pH 3～5，有沉淀生成。离心，取上清液，用乙醚萃取3次，每次10毫升。干燥沉淀，加乙醚振摇3次，每次10毫升，滤过，合并滤液，避光，低温干燥，用70%甲醇定容至10 毫升棕色容量瓶中，过0.45 μm的滤膜，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取阿魏酸对照品约5mg，置50毫升棕色容量瓶中，用甲醇超声波振荡溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用甲醇超声波振荡溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含阿魏酸10μg）。
2.4 阴性干扰试验：按方中比例取赤小豆、琥珀、海金沙、金钱草、鸡内金、蒲黄、牛膝等药材，按照制备工艺方法制成阴性制剂，按2.3项下方法制成供试品溶液，按色谱条件测定。结果表明：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与阿魏酸相同保留时间处不存在吸收峰，说明此方法具有较强的专属性。
2.5标准曲线的制备
制备浓度为4、8、16、20、24、28、32μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，阿魏酸对照品在4～32μg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6精密度试验
精密吸取阿魏酸对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.35%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批琥珀消石颗粒样品6份，分别制备成供试品，按色谱条件测定含量，并计算样品的RSD值为0.53%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
取供试品溶液，分别在0，1，2，3，4h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品阿魏酸峰面积积分值的RSD为0.65%。结果表明阿魏酸至少在4h内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的阿魏酸对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.66%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定琥珀消石颗粒三批样品中阿魏酸的含量，结果三批样品的含量分别为71μg/g、73μg/g、72μg/g。
3 讨论
3.1 流动相的选择
分别考察甲醇-水-冰乙酸（30∶69：1），乙腈-甲醇-冰乙酸-水（15：15∶3∶67），甲醇-冰乙酸-水（30∶3∶67），甲醇-水-磷酸（30∶70：0.2），乙腈-甲醇-水 （20∶10：70）不同比例的流动相，结果以甲醇-水-冰乙酸（30∶69：1）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-水-冰乙酸（30∶69：1）为流动相。
3.2 检测波长的选择
制备阿魏酸对照品稀释液，依照紫外分光光度法测定阿魏酸在322nm处有最大吸收峰，故选用322nm为检测波长。
琥珀消石颗粒原有质量标准只有性状、鉴别、溶化性等检验项目，没有含量测定。本实验对琥珀消石颗粒中阿魏酸的含量进行测定，为今后对琥珀消石颗粒的质量标准修订提供依据。本实验方法是一种简便、准确、安全的测定琥珀消石颗粒含量的方法。琥珀消石颗粒中阿魏酸的含量为不少于70μg/g。
参考文献
[1]邓永健，郭志伟，王萌.当归的化学成份及其药理作用研究进展[J].新疆中医药，2006（05）.
[2]韦玮，龚苏晓，张铁军，胡静.当归多糖类成分及其药理作用研究进展[J].药物评价研究，2009（02）.
[3]倪竹南，吕圭源，楼招欢，吴人杰.当归挥发油化学成分和药理作用研究进展[J].中国中医药信息杂志，2007（07）.
[4]刘雪东，李伟东，蔡宝昌.当归化学成分及对心脑血管系统作用研究进展[J].南京中医药大学学报，2010（02）.
[5]夏泉，张平，李绍平，王一涛.当归的药理作用研究进展[J].时珍国医国药，2004（03）.
[6]康军.当归化学成分及其药理作用研究进展[J].医药产业资讯，2005（23）.
[7]刘圆，贾敏如.RP-HPLC测定川芎、奶芎和山川芎中阿魏酸的含量[J].华西药学杂志，2004（05）.
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[9]季芳，吕雪芳，阮琴，何秋华，何新霞.川芎中阿魏酸的HPLC测定[J].中国现代应用药学，2003（02）.
[10]屈扬，黄熙，任平，张莉，张珊红，杨喜忠.HPLC法测定含川芎当归的常见煎剂中阿魏酸的含量[J].中草药，2004（10）.