为了解2018年江苏养殖场分离的1株H9N2亚型禽流感病毒A/chicken/Jiangsu/76/2018(JS/76)的遗传变异情况,对其HA基因进行了测序和遗传演化分析,并且成功构建JS/76的反向遗传操作系统.HA基因演化分析结果显示,JS/76毒株的HA基因裂解位点为PSRSSR↓GLF,是典型低致病性禽流感病毒(LPAIV)的特征序列.其216位氨基酸为亮氨酸(L),具有哺乳动物α-2,6唾液酸受体结合特征,并且在127位氨基酸额外增加了一个潜在糖基化NGT.随后,基于流感病毒的“12质粒系统”成功拯救该病毒,命名为r-JS/76,测定其血凝价为1:1 024.结果显示,r-JS/76在EID50和TCID50等方面保持了与亲本毒株相似的滴度.体外试验证明,拯救毒株与野生毒株在SPF鸡胚和MDCK细胞上的复制能力保持一致,受体结合试验表明拯救病毒与亲本病毒均具有人源受体结合特征,可能已获得感染哺乳动物和人的能力.本研究对H9N2亚型禽流感病毒HA基因遗传演化进行分析并成功建立其反向遗传操作技术平台,为今后探索H9N2流感病毒致病机理、传播机制与基因功能等研究奠定了基础.