【摘 要】
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奶牛乳房炎是奶牛养殖场常见疾病，为了有效预防奶牛乳房炎，降低药物残留，提高奶牛养殖的生产效益，为牛源无乳链球菌亚单位疫苗的制备提供一定的依据，本研究选取无乳链球菌免疫原性较好的enolase蛋白为靶标，克隆enolase基因、构建重组表达质粒。经过诱导、表达和纯化获得重组enolase蛋白。用纯化的蛋白加以佐剂对小鼠进行二次免疫，测定免疫后小鼠的血清抗体水平，评价enolase蛋白亚单位疫苗的免疫
【基金项目】
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四川农业大学学科建设双支计划项目（03571537）； 四川省科技厅科技支撑项目（2019YJ0650）；
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奶牛乳房炎是奶牛养殖场常见疾病，为了有效预防奶牛乳房炎，降低药物残留，提高奶牛养殖的生产效益，为牛源无乳链球菌亚单位疫苗的制备提供一定的依据，本研究选取无乳链球菌免疫原性较好的enolase蛋白为靶标，克隆enolase基因、构建重组表达质粒。经过诱导、表达和纯化获得重组enolase蛋白。用纯化的蛋白加以佐剂对小鼠进行二次免疫，测定免疫后小鼠的血清抗体水平，评价enolase蛋白亚单位疫苗的免疫效果和安全性。最终，成功从无乳链球菌分离株MN686586中扩增出enolase基因，构建出重组表达质粒pET-32a-enolase，经IPTG体外诱导表达，获得分子质量大小为67 ku的重组蛋白。用enolase亚单位疫苗免疫小鼠，间接ELISA检测小鼠血清抗体水平显示，二免后第14天小鼠血清抗体水平效价达到1∶25 600，并且相对免疫保护率（RPS）为100%。结果表明，enolase亚单位疫苗能够刺激小鼠产生一定的免疫应答和产生特异性抗体，已初步制备出针对牛源无乳链球菌的亚单位疫苗。
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