Δ133p53异构体在内质网应激诱导自噬促进细胞凋亡的机制研究

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目的研究p53异构体Δ133p53在内质网应激诱导细胞凋亡过程中的作用,探讨其对自噬的调节。方法应用p53缺失型1299细胞和Δ133p531299细胞为模型,利用Tunicamycin(20μg/ml)诱导的内质网应激导致细胞凋亡;采用免疫荧光方法分别进行凋亡蛋白M30检测以及采用活细胞染料acetoxymethyl(AM)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)对活细胞/死细胞检测以评价细胞凋亡。转染GFP-LC3质粒并通过自噬体点状结构计数以及Real-timePCR方法检测自噬相关基因的表达检测细胞自噬体的形成。结果在内质网应激条件下,Δ133p531299细胞比1299(p53-/-)对细胞凋亡的诱导更加敏感。与1299(p53-/-)细胞相比,在Tunicamycin诱导下,在Δ133p531299细胞中,凋亡蛋白M30高表达并且死细胞数量明显增多。在对自噬的调节方面,在内质网应激条件下,Δ133p53显著提高细胞自噬的形成。与1299(p53-/-)细胞相比,Δ133p531299细胞中自噬体点状结构计数增加较多,并且自噬相关基因ATG5的表达显著上调。结论在内质网应激诱导细胞凋亡过程中,Δ133p53通过诱导细胞自噬而促进细胞凋亡。
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