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摘要：目的：建立金英胆舒颗粒中大黄素和大黄酚的含量测定方法。方法：采用Shim Pack C18柱，甲醇：0.1％磷酸溶液(80:20)为流动相，检测波长为254nm。结果：大黄素的回收率为99.63％，RSD=0.79％(n=6)；大黄酚的回收率为98.10％，RSD=2.04％(n=6)。结论：本法简便、快速、重现性好，可作为该制剂的定量分析方法。
关键词：金英胆舒颗粒；大黄素；大黄酚；高效液相色谱
中图分类号：R927.2 文献标识码：A
文章编号：1007--2349(2009)09--0059--02
金英胆舒颗粒为临床验方开发的六类新药，现已取得临床研究批件，主要由大黄、金钱草、郁金、茵陈、柴胡、木香、蒲公英、枳壳、延胡索、白芍、鸡内金、甘草共12味中药组成，具有清热利湿，理气止痛，退黄排石的功效，用于胆道感染湿热气滞等症。大黄为方中君药，而大黄的主要有效成分为蒽醌类，主要为大黄素和大黄酚、大黄甲醚等，因此选择大黄素和大黄酚作为指标成分，在参考文献的基础上，建立了金英胆舒颗粒中大黄素和大黄酚的HPLC测定法，为该药的质量控制提供了定量评价方法。
1 仪器与试药
Waters 600型液相色谱仪(美国)；UV996二极管阵列检测器(美国)；大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110756--200110)；大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110709--200310)；甲醇(色谱纯)；水(重蒸水)；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2，1色谱条件色谱柱；Shim Pack C18柱(250×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇—0.1％磷酸溶液(80:20)；检测波长：254nm；柱温：室温；流速：1mL／min。在此条件下，样品中大黄素和大黄酚与其它组分能达到基线分离。见图1。
2，2对照品溶液制备取大黄素对照品、大黄酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含大黄素8μg、大黄酚16μg的混合溶液，即得。
2，3供试品溶液的制备取本品内容物，研细(过4号筛)，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5mL，置具塞锥形瓶中，挥去甲醇，加2.5mol／L硫酸溶液10mL，超声处理5min，加三氯甲烷10ml，加热回流1h，冷却，移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷液，酸液用三氯甲烷提取2次，每次10mL，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇温热溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2，4阴性样品溶液的制备缺大黄的阴性样品，研细(过4号筛)，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5mL，置具塞锥形瓶中，挥去甲醇，加2.5mol／L硫酸溶液10mL，超声处理5分钟，加三氯甲烷10mL，加热回流1，冷却，移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷液，酸液用三氯甲烷提取2次，每次10mL，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇温热溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2，5标准曲线的制备
精密吸取大黄素对照品(24，5μg／mL)和大黄酚对照品(44.7μg／mL)混合溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0mL，分别置10mL量瓶中，分别加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取10μL，依次注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定，分别以大黄素浓度和大黄酚浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，计算，分别得线性回归方程为：大黄素：A＝37507C+8045，r＝0.9999(n＝5)。大黄酚：A＝56064C+18217，r＝0.9998(n=5)。大黄素浓度在2.45μg／mL～19.60ug／mL范围内与吸收度峰面积值呈良好的线性关系；大黄酚浓度在4.47μg／mL～35.76／μg／mL范围内与吸收度峰面积值呈良好的线性关系。
2，6精密度试验精密吸取样品溶液20μL进样，测定，重复5次，结果RSD为1.82％。证明精密度良好。结果见表1。
2，7色谱进样稳定性试验取样品溶液立即测定与在室温放置，每隔2h进行1次，连续测定5次，结果大黄素RSD＝0.81％，大黄酚RSD=0.91％。证明样品中大黄素和大黄酚在8h内稳定。
2，8重现性试验依法取同一样品，按样品测定方法项下，进行5次平行试验，结果表明本法重复性较好，大黄素(0.6469mg／g)和大黄酚(1.4801mg／g)的RSD分别为2，18％、1.43％。结果见表2。
2，9加样回收率试验按样品测定方法项下，精密称取已知含量的样品，分别加入一定量的大黄素和大黄酚对照品，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果表明本法具有良好的准确性，结果见表3。
统计学处理：大黄素x＝99.63％，RSD＝0.79％；大黄酚X=98.10％，RSD=2.04％2，10样品的测定精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，按上述色谱条件测定，以外标法计算大黄素和大黄酚含量，结果见表4。
3 讨论
大黄素和大黄酚不太稳定，见光易氧化，对照品和样品的配制应使用棕色瓶，对照品尽量当天配制当天使用，避免其分解破坏，而影响测定结果。
流动相进行了大量的筛选，采用甲醇：0.1％磷酸溶液(80:20)为流动相，在保证分离度的同时又能使分析时间较短。因此采用此流动相。
采用本实验方法结果表明本法简便、准确、重现性好，可作为本品的质量控制标准，亦可为含大黄制剂的质量控制提供参考。
关键词：金英胆舒颗粒；大黄素；大黄酚；高效液相色谱
中图分类号：R927.2 文献标识码：A
文章编号：1007--2349(2009)09--0059--02
金英胆舒颗粒为临床验方开发的六类新药，现已取得临床研究批件，主要由大黄、金钱草、郁金、茵陈、柴胡、木香、蒲公英、枳壳、延胡索、白芍、鸡内金、甘草共12味中药组成，具有清热利湿，理气止痛，退黄排石的功效，用于胆道感染湿热气滞等症。大黄为方中君药，而大黄的主要有效成分为蒽醌类，主要为大黄素和大黄酚、大黄甲醚等，因此选择大黄素和大黄酚作为指标成分，在参考文献的基础上，建立了金英胆舒颗粒中大黄素和大黄酚的HPLC测定法，为该药的质量控制提供了定量评价方法。
1 仪器与试药
Waters 600型液相色谱仪(美国)；UV996二极管阵列检测器(美国)；大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110756--200110)；大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110709--200310)；甲醇(色谱纯)；水(重蒸水)；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2，1色谱条件色谱柱；Shim Pack C18柱(250×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇—0.1％磷酸溶液(80:20)；检测波长：254nm；柱温：室温；流速：1mL／min。在此条件下，样品中大黄素和大黄酚与其它组分能达到基线分离。见图1。
2，2对照品溶液制备取大黄素对照品、大黄酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含大黄素8μg、大黄酚16μg的混合溶液，即得。
2，3供试品溶液的制备取本品内容物，研细(过4号筛)，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5mL，置具塞锥形瓶中，挥去甲醇，加2.5mol／L硫酸溶液10mL，超声处理5min，加三氯甲烷10ml，加热回流1h，冷却，移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷液，酸液用三氯甲烷提取2次，每次10mL，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇温热溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2，4阴性样品溶液的制备缺大黄的阴性样品，研细(过4号筛)，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5mL，置具塞锥形瓶中，挥去甲醇，加2.5mol／L硫酸溶液10mL，超声处理5分钟，加三氯甲烷10mL，加热回流1，冷却，移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷液，酸液用三氯甲烷提取2次，每次10mL，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇温热溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2，5标准曲线的制备
精密吸取大黄素对照品(24，5μg／mL)和大黄酚对照品(44.7μg／mL)混合溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0mL，分别置10mL量瓶中，分别加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取10μL，依次注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定，分别以大黄素浓度和大黄酚浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，计算，分别得线性回归方程为：大黄素：A＝37507C+8045，r＝0.9999(n＝5)。大黄酚：A＝56064C+18217，r＝0.9998(n=5)。大黄素浓度在2.45μg／mL～19.60ug／mL范围内与吸收度峰面积值呈良好的线性关系；大黄酚浓度在4.47μg／mL～35.76／μg／mL范围内与吸收度峰面积值呈良好的线性关系。
2，6精密度试验精密吸取样品溶液20μL进样，测定，重复5次，结果RSD为1.82％。证明精密度良好。结果见表1。
2，7色谱进样稳定性试验取样品溶液立即测定与在室温放置，每隔2h进行1次，连续测定5次，结果大黄素RSD＝0.81％，大黄酚RSD=0.91％。证明样品中大黄素和大黄酚在8h内稳定。
2，8重现性试验依法取同一样品，按样品测定方法项下，进行5次平行试验，结果表明本法重复性较好，大黄素(0.6469mg／g)和大黄酚(1.4801mg／g)的RSD分别为2，18％、1.43％。结果见表2。
2，9加样回收率试验按样品测定方法项下，精密称取已知含量的样品，分别加入一定量的大黄素和大黄酚对照品，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果表明本法具有良好的准确性，结果见表3。
统计学处理：大黄素x＝99.63％，RSD＝0.79％；大黄酚X=98.10％，RSD=2.04％2，10样品的测定精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，按上述色谱条件测定，以外标法计算大黄素和大黄酚含量，结果见表4。
3 讨论
大黄素和大黄酚不太稳定，见光易氧化，对照品和样品的配制应使用棕色瓶，对照品尽量当天配制当天使用，避免其分解破坏，而影响测定结果。
流动相进行了大量的筛选，采用甲醇：0.1％磷酸溶液(80:20)为流动相，在保证分离度的同时又能使分析时间较短。因此采用此流动相。
采用本实验方法结果表明本法简便、准确、重现性好，可作为本品的质量控制标准，亦可为含大黄制剂的质量控制提供参考。