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目的
探讨细胞培养基底刚度在登革病毒(Dengue virus,DENV)感染人原代脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的影响。
方法利用丙烯酰胺和双丙烯酰胺制备模拟正常人血管内皮细胞基底刚度的水凝胶[(0±4)kPa],MTS法检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,常规方法鉴定增殖登革病毒2型(DENV-2),DENV-2(MOI=10)感染人原代脐静脉内皮细胞,MTS法比较种植在传统塑料基底与水凝胶上的HUVEC被DENV-2感染后对细胞增殖率的影响,并通过硝酸还原酶法检测两组细胞释放一氧化氮(NO)的水平以及双抗体夹心ELISA法检测内皮素-1(ET-1)的表达。
结果自重弯曲法测得2%双丙烯酰胺和40%丙烯酰胺配比水凝胶的弹性模量为(3030±0.44) Pa;血管内皮细胞经登革病毒感染后其细胞增殖率与培养基底刚度呈正相关;两组不同刚度基底培养的细胞生长周期和细胞凋亡率无明显差异,但可引起NO和ET-1水平的变化。
结论实验结果证实基底刚度可影响人原代HUVEC的增殖效率及释放的NO与ET-1浓度的变化,血管内皮受损后,其分泌合成的血管活性物质减少,参与了登革热的致病发生。同时水凝胶模型的建立为研究DENV感染的体外模型提供一定的新思路。