【摘 要】
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目的 研究甲胎蛋白(AFP)对肝癌细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体-2(DR5)表达及其在肝癌细胞耐受TRAIL中的作用.方法 用Western blot法分析全反式维甲酸(ATRA)处
【机 构】
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海南医学院附属医院检验科,海南医学院分子生物学重点实验室,海南医学院病理生理学教研室,海南医学院肿瘤研究所
【基金项目】
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海南省卫生厅基金;海南省自然科学基金;国家自然科学基金
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目的 研究甲胎蛋白(AFP)对肝癌细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体-2(DR5)表达及其在肝癌细胞耐受TRAIL中的作用.方法 用Western blot法分析全反式维甲酸(ATRA)处理人肝癌细胞株Bel 7402细胞24 h后DR5表达的变化;免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与维甲酸受体(RAR)-β相互作用;激光共聚焦显微镜观察AFP与RAR-β的细胞共定位; RNA干扰技术抑制Bel 7402细胞AFP表达,再用ATRA处理24h后检测细胞内DR5表达的变化;用pcDNA3.1质粒和人AFP基因连接构建表达AFP的载体(称为pcDNA3.1-afp),然后转染到不表达AFP的人肝癌细胞株HLE细胞;细胞生长状况用四甲基偶氮唑盐法检测.组间比较用f检验进行统计学分析.结果 Bel 7402和HLE细胞低表达DR5,ATRA(160μmol/L)处理24h后能促进肝癌细胞DR5表达; Co-IP技术研究显示AFP能与RAR-β结合;共聚焦显微镜观察发现AFP与RAR-β共定位于细胞质;干扰AFP表达后,Bel 7402细胞的DR5表达明显提高,抑制AFP表达后,ATRA能显著促进Bel 7402细胞内DR5的表达,并增加Bel 7402细胞对TRAIL的敏感性;转染pcDNA3.1-afp载体后,HLE细胞内的AFP能与RAR-β结合,并发现pcDNA3.1-afp载体能对抗TRAIL诱导HLE细胞凋亡.结论 Bel 7402细胞内表达的AFP具有抑制DR5表达的生物学功能;AFP可能通过抑制RAR-β入核调节DR5的表达;细胞内高表达的AFP是导致Bel 7402细胞耐受TRAIL诱导细胞凋亡的重要原因.
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