论文部分内容阅读
目的
观察细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶抑制剂4a(INK4a)信号通路对线粒体功能的影响。
方法重组慢病毒载体pLVX-p16INK4a被构建出并感染第3代人骨骼肌成肌细胞，用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法与Western blot鉴定p16INK4a基因转录与蛋白表达，7 d后，用衰老相关β-半乳糖苷酶染色鉴定细胞衰老程度。同时，用JC-1染料染色和流式细胞仪分别检测线粒体膜电位水平。
结果成功转染了p16INK4a的成肌细胞出现明显衰老表型，其细胞线粒体膜电位为(－40.287±12.663) mV，较阳性对照(CV)及阴性对照(NC)组的(－9.267±1.332) mV和(－6.967±2.031) mV明显下降(P＝0.000)，而p16INK4a蛋白和mRNA相对表达量分别为45.25±8.21和33.89±7.87，明显高于CV组的10.18±2.69和5.26±1.92及NC组的9.41±1.70和7.16±1.86(P＝0.000)。
结论INK4a信号通路的上调导致了人骨骼肌成肌细胞的衰老，INK4a通路是人骨骼肌成肌细胞衰老的直接诱因；另外，INK4a通路能对线粒体通路产生作用，使线粒体膜电位下降，激发线粒体通路，间接加速成肌细胞的衰老。