【摘 要】
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采用自行设计的引物,从洋葱伯克霍尔德氏菌L68中PCR扩增得到phnE（邻苯二酚2,3-双加氧酶）基因,亚克隆到高表达载体pET 32a上,转入表达菌株中.经双向测序,证实构建过程中未出现突
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（30370014）.
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采用自行设计的引物,从洋葱伯克霍尔德氏菌L68中PCR扩增得到phnE（邻苯二酚2,3-双加氧酶）基因,亚克隆到高表达载体pET 32a上,转入表达菌株中.经双向测序,证实构建过程中未出现突变.重组子经IPTG诱导后,可以表达有活性的重组双加氧酶.选择26 ℃进行重组蛋白诱导.薄层扫描显示,表达重组蛋白总量最高可占总蛋白的64.92%.利用金属螯合层析对重组蛋白进行了一步纯化,SDS-PAGE结果显示,重组蛋白纯度达到95%.
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