【摘 要】
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利用重叠延伸PCR法克隆出人脂联素基因,连接至克隆载体pGEM-T中,转化大肠杆菌DH5α,通过测序对其进行序列分析后,进一步构建毕赤酵母表达载体pPIC3.5K-ADPN,通过电击法转化毕
【机 构】
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西北大学生命科学学院西部资源生物与现代生物技术省部共建教育部重点实验室,湖南工程学院化学化工系
【基金项目】
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陕西省重点攻关项目(No.05JS47)资助~~
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利用重叠延伸PCR法克隆出人脂联素基因,连接至克隆载体pGEM-T中,转化大肠杆菌DH5α,通过测序对其进行序列分析后,进一步构建毕赤酵母表达载体pPIC3.5K-ADPN,通过电击法转化毕赤酵母GS115,转化的重组酵母菌用甲醇诱导外源基因表达。经PCR、Southern blotting鉴定,获得了重组毕赤酵母菌株;经甲醇诱导人脂联素基因表达,Western blotting杂交鉴定证明人脂联素基因已经在毕赤酵母中成功表达。结果表明重叠延伸PCR法准确方便克隆出人脂联素基因,在30oC,1%甲醇诱导48h,人脂联素基因在巴斯德毕赤酵母中的表达最佳。
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