重组载体pLNCX／iNOS的构建及其在NIH3T3细胞中滴度的测定

来源 :东南大学学报(医学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户：yanghongtao3446

【摘要】

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目的:构建重组质粒pLNCX/iNOS.方法:用PCR技术从pCMV/iNOS质粒中扩增出iNOS全长cDNA,与逆转录病毒pLNCX构建重组质粒pLNCX/iNOS;通过脂质体介导把重组质粒转染入包装细胞PA31

【作者】

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陈宝安朱梁军朱敏生潘英杜娟陈苏宁王骏邵泽叶

【机构】

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东南大学附属中大医院,江苏省肿瘤研究所,南京军区军事医学研究所

【出处】

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东南大学学报(医学版)

【发表日期】

：

2002年2期

【关键词】

：

一氧化氮合酶逆转录病毒基因转染聚合酶链反应 NOS 肿瘤治疗一氧化氮 nitric oxide synthase retroviral vector g

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目的:构建重组质粒pLNCX/iNOS.方法:用PCR技术从pCMV/iNOS质粒中扩增出iNOS全长cDNA,与逆转录病毒pLNCX构建重组质粒pLNCX/iNOS;通过脂质体介导把重组质粒转染入包装细胞PA317中,经G418筛选出抗性克隆.通过NIH3T3细胞测定病毒滴度.结果:经过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定重组质粒构建正确.G418筛选出16个抗性克隆,能稳定合成并分泌重组逆转录病毒颗粒.NIH3T3细胞测定病毒滴度为2.1×104CFUml-1.结论:逆转录病毒载体pLNCX可有效地

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