【摘 要】
：
目的利用RNA干扰技术,以人CCL20基因为靶基因,设计CCL20基因特异性的小干扰RNA(siRNA),构建其短发夹RNA(shRNA)重组慢病毒表达载体,并进行测序鉴定.方法设计并合成人CCL20基
【机 构】
：
第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,贝尔法斯特女王大学癌症研究和细胞生物学中心
论文部分内容阅读
目的利用RNA干扰技术,以人CCL20基因为靶基因,设计CCL20基因特异性的小干扰RNA(siRNA),构建其短发夹RNA(shRNA)重组慢病毒表达载体,并进行测序鉴定.方法设计并合成人CCL20基因特异性的DNA寡核苷酸,连接到经Spe Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切线性化的pHSER-dsRNA-GFP-SIN质粒上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性菌落、扩增后提取质粒,进行DNA测序鉴定.结果将合成的两对人CCL20基因特异性DNA寡核苷酸序列退火后,分别克隆到线性化的pHSER-dsRNA-GFP-SIN载体质粒上.在氨苄青霉素培养基条件下,筛选出相应的阳性菌落,经DNA测序鉴定确实为所需序列.结论构建成功了2对人CCL20基因特异性shRNA重组慢病毒表达载体,可进一步用于干扰CCL20基因的mRNA转录,从而为制备CCL20基因表达抑制型的人角朊干细胞奠定基础.
其他文献
吡啶及其衍生物是农药和医药中间体的基础原料,市场前景广阔.但长期以来,煤焦油中提取的吡啶及其衍生物主要质量指标为蒸馏试验,色谱分析纯度只有96％左右,难以满足市场需要.本
谷氨酸门控氯离子通道受体目前仅发现存在于无脊椎动物的神经系统中,是理想的杀虫剂标靶之一。阿维菌素因其高效、低毒、高选择性的特点是目前全球使用范围最广的生物杀虫剂
在当今网络的入侵事件频频发生,使得网络变得十分不安全,因此为了增强网络的安全性,必须加强入侵检测技术的智能性。在入侵检测技术中误用检测和异常检测是2种主要检测技术,
利用图像测量织物颜色的首要工作是识别出适合测色的区域,针对均值聚类算法(k-means)在聚类中心和类别数选取中存在的缺点,提出了改进的聚类算法.将RGB色泽分布中局部极大点
火道温度稳定在一定范围内是焦炉加热过程优化控制的目的,也是保证焦炭质量、提高产量的前提.针对焦炉加热过程大滞后、强耦合等特点,提出一种基于极限学习机(ELM)的预测算法
研究超声物料输送装置的压电振子,其工作模态为面内弯曲振动.通过动态设计找出两个频率相等波长相差45°的弯曲振型,实现跑道形振子面内弯曲行波,使上下横梁产生微观运动,通
具有粘果山羊草和偏凸山羊草细胞质的K、Ven小麦雄性不育系与普通小麦的核质互作及细胞质的不良效应较低,在小麦杂种优势的利用上最有价值和利用前景,试验针对西北春麦区生态
目的 建立两种机会性寄生原虫--微小隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫(贾第虫)基因检测方法.方法 从微小隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫感染者粪便标本内分离纯化卵囊和包囊,提取基因组DN
利用免疫荧光显微镜技术和免疫胶体金标记技术确定蚕豆气孔保卫细胞中存在一氧化氮合酶(NOS)类似蛋白,NOS主要分布在气孔保卫细胞的细胞核、细胞质、叶绿体、线粒体以及细胞