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摘要 对同一贝类养殖生产区域内，生长环境中影响贝类微生物富集的主要因素及持续降雨对贝类中微生物含量的影响进行了研究。结果表明，养殖水质的变化在一定程度上影响贝类富集大肠杆菌，而底泥中微生物的变化对贝类富集大肠杆菌的影响并不直接;持续降雨后遇到晴天，泥蚶富集微生物的能力加强，贝肉内大肠杆菌群和菌落总数偏高;在持续降雨期间，缢蛏体内大肠杆菌群和菌落总数明显偏高，特别是在持续降雨后遇到晴天时菌落总数显著增长。
关键词 贝类;微生物;富集能力;持续降雨;养殖环境
中图分类号 S917.1文献标识码 A
文章编号 0517-6611（2019）19-0115-03
doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.19.034
Abstract This paper investigated the main influencing factors of microbial enrichment capacity in the growth environment of shellfish in the same aquaculture environment of shellfish and studied the effects of continuous rainfall on the microbe content in shellfish. The results showed that the changes of water quality affected the enrichment of Escherichia coli in shellfish to some extent，but the changes of microbe in the sediment had no direct effect on the enrichment of E. coli in shellfish. The microbial enrichment capacity of Tegillarca granosa was higher and the amount of E. coli and total amount of bacterial colonies increased in shellfish in sunny days after continuous rainfall. During the continuous rainfall period，the amount of E. coli and total amount of bacterial colonies were obviously higher in S.constricta. Especially， the total amount of bacterial colonies obviously increased in the sunny days after continuous rainfall.
Key words Shellfish;Microbe;Enrichment capacity;Continuous rainfall;Aquaculture environment
随着我国沿海城市工业的迅速发展，人口向城市流动，向海洋排放的废弃物日益增多，使部分水域受到不同程度污染[1]。贝类的生长位置比较稳定，一旦遇到水质污染，很难不对贝类生长造成影响[2]。加上双壳贝类属于滤食性生物，在滤食饵料生物的同时，也将水中的有害物质吸入体内，食用不清洁贝类极易引发疾病，从而局部暴发食品中毒事件[3-4]。我国政府近年来对此十分重视，多次对沿海地区部分经济贝类的卫生状况开展大规模调查研究，采取多种措施，加强对贝类的卫生管理，确保贝类的食用安全。为保障消费者食用贝类产品的卫生和安全，农业农村部渔业局从2003年起，对我国主要贝类养殖海域的环境状况以及养殖贝类卫生状况进行了分类管理工作[5]。同时，经过多年的贝类划型工作和长期的总结经验发现，对于同一贝类养殖生产区域内，生长环境中影响贝类微生物富集的主要因素及持续降雨对贝类中微生物含量的影响尚不清楚。笔者研究了影响贝类微生物富集的主要环境因素，探讨了持续降雨环境对贝类富集微生物的影响，以期进一步完善贝类养殖生产区划型工作方案，为阐明品種差异对贝类监测和划型结果的影响提供参考。
1 材料与方法
1.1 仪器与设备
隔水式恒温培养箱（型号GHP -9270）;智能光照培养箱（型号GXZ）;生物安全柜（型号BSC-1000 ⅡA2）;立式压力蒸汽灭菌器（型号YXQ-LS-50G）;其他实验室常用设备。
1.2 试材与试剂
月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤、EC肉汤（Escherichia coli broth）、乳糖蛋白胨肉汤、伊红美蓝（EMB）琼脂、营养琼脂、平板计数琼脂（PCA）、2216E琼脂、HBI生化鉴定试剂盒均购自青岛海博生物技术有限公司。所有培养基均需在121 ℃下高压灭菌20 min;其余均为实验室常用试剂。
1.3 测定项目与方法 大肠杆菌按照GB 4789.38—2012《食品微生物学检验 大肠埃希氏菌计数》测定;菌落总数按照GB 4789.2—2010《食品微生物学检验 菌落总数测定》测定。
1.3.1 海水中粪大肠菌群和细菌总数的检测。参照GB17378.7—2007《海洋监测规范 第7部分近海污染生态调查和生物监测》。
1.3.2 底泥微生物检测。取25 g底泥样品放入盛有225 mL磷酸盐缓冲液的玻璃瓶内，摇匀静置后取上清液进行底泥微生物检测，具体检测方法参考海水中粪大肠菌群和细菌总数的检测方法。 1.4 方法
1.4.1 养殖环境的影响因素试验。
2018年7—9月，在对混合养殖围塘进行3次贝类样品抽样的同时，抽取海水养殖围塘中的水和底泥。龙湾1号、2号塘均位于温州龙湾区永兴五溪镇，除底泥参数不同外，水体为同一海水水体。选取龙湾1号、2号塘为试验塘，并以2塘中养殖品种文蛤为研究贝类，选取易受环境影响的大肠杆菌进行试验。在试验期间，养殖户在7、8、9月对养殖塘换水1次，换水后7 d进行抽样检测。
1.4.2 降雨对贝类微生物含量的影响。2018年11月9日至11月23日，每天定时在乐清市蒲岐镇东门外村、清江镇蔡岙村养殖场采集泥蚶、缢蛏样品和水体样品进行检测，并记录每天的天气状况[平均气温为（20±2）℃]，连续采样监测15 d。试验结束时，记录试验结果，并绘制微生物的变化曲线。
2 结果与分析
2.1 水质对贝类富集微生物的影响
从图1、2可以发现，2018年7—9月，水体中粪大肠菌群和细菌总数先减少后增加，2个养殖塘中文蛤体内的大肠杆菌数也随之增加、减少。特别是在9月，大肠杆菌数显著增加。因此，养殖水质的变化在一定程度上影响了贝类富集大肠杆菌。
2.2 底泥对贝类富集微生物的影响 从图1可以发现，在7月、8月2号塘文蛤中大肠杆菌数要比1号塘多，9月则正好相反。从图3可以看出，试验期间1号塘中底泥中粪大肠菌群和细菌总数均比2号塘多。因此，底泥中微生物的变化对贝类富集大肠杆菌的影响并不直接。由此推测，水体中微生物的变化对贝类富集大肠杆菌的影响比底泥微生物的变化更为直接。
2.3 持续降雨对贝类微生物含量的影响
从图4可以看出，持续降雨对泥蚶富集微生物有一定影响[6-8]。以贝类一类生产区和二类生产区的分界点（大肠杆菌数2 300 MPN/kg）为临界值，超过2 300 MPN/kg的日期分别为11月10日、18日、22日和23日，其大肠杆菌数分别为9 300、4 300、9 300和9 300 MPN/kg，其余日期大肠杆菌数均不高于2 300 MPN/kg。结合天气情况发现，11月10日、18日、22日和23日均为多云或晴天，并且此前几天都有明显的降雨过程。此外，这4天相应的菌落总数分别为75.0×103、44.0×103、9.4×103和15.8×103 CFU/g。因此，持续降雨后遇到晴天，泥蚶富集微生物的能力加强，贝肉内大肠杆菌和菌落总数偏高。
从图5可以看出，在持续降雨监测的几天中，缢蛏样品中的大肠杆菌数一直偏高。以贝类二类生产区和三类生产区的分界点（大肠杆菌数46 000 MPN/kg）为临界值，超过46 000 MPN/kg的天數有10 d。此外，菌落总数明显偏高的日期为
11月9日、10日、18日和23日，分别为132×103、471×103、146×103和117×103 CFU/g。这几天均为多云或晴天，气温偏高。因此，在持续降雨期间，缢蛏中大肠杆菌数和菌落总数明显偏高，特别是在持续降雨后遇到晴天，菌落总数增长显著。结合图6和图7水体中粪大肠菌群和细菌总数的变化，究其原因，是因为海洋是地表径流最终的汇入场所，滩涂贝类养殖区属于近海养殖区，受地表径流汇入的影响最为直接，而且地表径流量会受污染源（生活污水、工业废水等）的影响[9-11]。持续降雨导致地表径流快速涌入近海，将富含大量微生物的水体带入滩涂贝类养殖区，加上雨后天晴，气温升高，微生物快速生长。水体是贝类生长的直接外部环境，是贝类富集微生物的外部因素，水体中微生物数量的增加最终会导致贝类体内微生物数量的增加。
3 结论
通过抽样检测贝类养殖围塘中水体和底泥的微生物含量，确定影响贝类微生物富集的直接因素。结果表明，养殖水体中粪大肠菌群和细菌总数的变化与贝类体内大肠杆菌含量存在一定的正相关，而底泥中微生物的变化对贝类富集大肠杆菌的影响并不直接。因此，水体中微生物的变化对贝类富集大肠杆菌的影响比底泥更为明显。在持续降雨期间，连续每天对养殖场泥蚶、缢蛏样品及水体进行微生物检测，结果表明持续降雨后遇到晴天，泥蚶富集微生物的能力加强，贝肉内大肠杆菌和菌落总数偏高。对缢蛏而言，在持续降雨期间其大肠杆菌数和菌落总数明显偏高，特别是在持续降雨后遇到晴天，菌落总数显著增长。
参考文献
[1]HO B S W，TAM T Y.Natural depuration of shellfish for human consumption：A note of caution[J]. Water research，2000，34（4）：1401-1406.
[2] MURCHIE L W，CRUZROMERO M，KERRY J P，et al. High pressure processing of shellfish：A review of microbiological and other quality aspects[J].Innovative food science and emerging technologies，2005，6（3）：257-270.
[3] 蔡友琼，乔庆林，徐捷.我国贝类卫生现状及贝类净化概况[J].渔业现代化，2002（6）：7-9.
[4] OLIVERIA J，CUNHA A，CASTILHO F，et al. Microbial contamination and purification of bivalve shellfish：Crucial aspects in monitoring and future perspectivesA minireview[J].Food control，2011，22（6）：805-816.
[5] 刘欢，宋怿，马兵，等.国内外养殖贝类质量安全管理比对及我国贝类质量安全管理探讨分析[J].中国水产，2012（4）：30-33.
[6] 李帅军，郭剑芬，吴东梅，等.隔离降雨对米槠天然林土壤微生物生物量和酶活性的影响[J].亚热带资源与环境学报，2018，13（1）：17-25.
[7] 李旺霞，陈彦云，陈科元，等.不同降雨量对雨养农业区土壤酶活性和土壤微生物的影响[J].南方农业学报，2015，46（9）：1579-1583.
[8] 高沛力.雨季对海水养殖的影响及应对措施[J].河北渔业，2014（10）：21-22.
[9] 徐开发.滩涂贝类养殖环境中的污染物与环境问题展望[J].乡村科技，2016（18）：96.
[10] 林巨华.海洋滩涂贝类养殖环境及病害防治研究[J].湖南农机，2014，41（7）：163-164.
[11] 刘斌，陶莹，党晓霞.滩涂养殖对海洋生态系统的影响[J].创新，2010（1）：58-60.
关键词 贝类;微生物;富集能力;持续降雨;养殖环境
中图分类号 S917.1文献标识码 A
文章编号 0517-6611（2019）19-0115-03
doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.19.034
Abstract This paper investigated the main influencing factors of microbial enrichment capacity in the growth environment of shellfish in the same aquaculture environment of shellfish and studied the effects of continuous rainfall on the microbe content in shellfish. The results showed that the changes of water quality affected the enrichment of Escherichia coli in shellfish to some extent，but the changes of microbe in the sediment had no direct effect on the enrichment of E. coli in shellfish. The microbial enrichment capacity of Tegillarca granosa was higher and the amount of E. coli and total amount of bacterial colonies increased in shellfish in sunny days after continuous rainfall. During the continuous rainfall period，the amount of E. coli and total amount of bacterial colonies were obviously higher in S.constricta. Especially， the total amount of bacterial colonies obviously increased in the sunny days after continuous rainfall.
Key words Shellfish;Microbe;Enrichment capacity;Continuous rainfall;Aquaculture environment
随着我国沿海城市工业的迅速发展，人口向城市流动，向海洋排放的废弃物日益增多，使部分水域受到不同程度污染[1]。贝类的生长位置比较稳定，一旦遇到水质污染，很难不对贝类生长造成影响[2]。加上双壳贝类属于滤食性生物，在滤食饵料生物的同时，也将水中的有害物质吸入体内，食用不清洁贝类极易引发疾病，从而局部暴发食品中毒事件[3-4]。我国政府近年来对此十分重视，多次对沿海地区部分经济贝类的卫生状况开展大规模调查研究，采取多种措施，加强对贝类的卫生管理，确保贝类的食用安全。为保障消费者食用贝类产品的卫生和安全，农业农村部渔业局从2003年起，对我国主要贝类养殖海域的环境状况以及养殖贝类卫生状况进行了分类管理工作[5]。同时，经过多年的贝类划型工作和长期的总结经验发现，对于同一贝类养殖生产区域内，生长环境中影响贝类微生物富集的主要因素及持续降雨对贝类中微生物含量的影响尚不清楚。笔者研究了影响贝类微生物富集的主要环境因素，探讨了持续降雨环境对贝类富集微生物的影响，以期进一步完善贝类养殖生产区划型工作方案，为阐明品種差异对贝类监测和划型结果的影响提供参考。
1 材料与方法
1.1 仪器与设备
隔水式恒温培养箱（型号GHP -9270）;智能光照培养箱（型号GXZ）;生物安全柜（型号BSC-1000 ⅡA2）;立式压力蒸汽灭菌器（型号YXQ-LS-50G）;其他实验室常用设备。
1.2 试材与试剂
月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤、EC肉汤（Escherichia coli broth）、乳糖蛋白胨肉汤、伊红美蓝（EMB）琼脂、营养琼脂、平板计数琼脂（PCA）、2216E琼脂、HBI生化鉴定试剂盒均购自青岛海博生物技术有限公司。所有培养基均需在121 ℃下高压灭菌20 min;其余均为实验室常用试剂。
1.3 测定项目与方法 大肠杆菌按照GB 4789.38—2012《食品微生物学检验 大肠埃希氏菌计数》测定;菌落总数按照GB 4789.2—2010《食品微生物学检验 菌落总数测定》测定。
1.3.1 海水中粪大肠菌群和细菌总数的检测。参照GB17378.7—2007《海洋监测规范 第7部分近海污染生态调查和生物监测》。
1.3.2 底泥微生物检测。取25 g底泥样品放入盛有225 mL磷酸盐缓冲液的玻璃瓶内，摇匀静置后取上清液进行底泥微生物检测，具体检测方法参考海水中粪大肠菌群和细菌总数的检测方法。 1.4 方法
1.4.1 养殖环境的影响因素试验。
2018年7—9月，在对混合养殖围塘进行3次贝类样品抽样的同时，抽取海水养殖围塘中的水和底泥。龙湾1号、2号塘均位于温州龙湾区永兴五溪镇，除底泥参数不同外，水体为同一海水水体。选取龙湾1号、2号塘为试验塘，并以2塘中养殖品种文蛤为研究贝类，选取易受环境影响的大肠杆菌进行试验。在试验期间，养殖户在7、8、9月对养殖塘换水1次，换水后7 d进行抽样检测。
1.4.2 降雨对贝类微生物含量的影响。2018年11月9日至11月23日，每天定时在乐清市蒲岐镇东门外村、清江镇蔡岙村养殖场采集泥蚶、缢蛏样品和水体样品进行检测，并记录每天的天气状况[平均气温为（20±2）℃]，连续采样监测15 d。试验结束时，记录试验结果，并绘制微生物的变化曲线。
2 结果与分析
2.1 水质对贝类富集微生物的影响
从图1、2可以发现，2018年7—9月，水体中粪大肠菌群和细菌总数先减少后增加，2个养殖塘中文蛤体内的大肠杆菌数也随之增加、减少。特别是在9月，大肠杆菌数显著增加。因此，养殖水质的变化在一定程度上影响了贝类富集大肠杆菌。
2.2 底泥对贝类富集微生物的影响 从图1可以发现，在7月、8月2号塘文蛤中大肠杆菌数要比1号塘多，9月则正好相反。从图3可以看出，试验期间1号塘中底泥中粪大肠菌群和细菌总数均比2号塘多。因此，底泥中微生物的变化对贝类富集大肠杆菌的影响并不直接。由此推测，水体中微生物的变化对贝类富集大肠杆菌的影响比底泥微生物的变化更为直接。
2.3 持续降雨对贝类微生物含量的影响
从图4可以看出，持续降雨对泥蚶富集微生物有一定影响[6-8]。以贝类一类生产区和二类生产区的分界点（大肠杆菌数2 300 MPN/kg）为临界值，超过2 300 MPN/kg的日期分别为11月10日、18日、22日和23日，其大肠杆菌数分别为9 300、4 300、9 300和9 300 MPN/kg，其余日期大肠杆菌数均不高于2 300 MPN/kg。结合天气情况发现，11月10日、18日、22日和23日均为多云或晴天，并且此前几天都有明显的降雨过程。此外，这4天相应的菌落总数分别为75.0×103、44.0×103、9.4×103和15.8×103 CFU/g。因此，持续降雨后遇到晴天，泥蚶富集微生物的能力加强，贝肉内大肠杆菌和菌落总数偏高。
从图5可以看出，在持续降雨监测的几天中，缢蛏样品中的大肠杆菌数一直偏高。以贝类二类生产区和三类生产区的分界点（大肠杆菌数46 000 MPN/kg）为临界值，超过46 000 MPN/kg的天數有10 d。此外，菌落总数明显偏高的日期为
11月9日、10日、18日和23日，分别为132×103、471×103、146×103和117×103 CFU/g。这几天均为多云或晴天，气温偏高。因此，在持续降雨期间，缢蛏中大肠杆菌数和菌落总数明显偏高，特别是在持续降雨后遇到晴天，菌落总数增长显著。结合图6和图7水体中粪大肠菌群和细菌总数的变化，究其原因，是因为海洋是地表径流最终的汇入场所，滩涂贝类养殖区属于近海养殖区，受地表径流汇入的影响最为直接，而且地表径流量会受污染源（生活污水、工业废水等）的影响[9-11]。持续降雨导致地表径流快速涌入近海，将富含大量微生物的水体带入滩涂贝类养殖区，加上雨后天晴，气温升高，微生物快速生长。水体是贝类生长的直接外部环境，是贝类富集微生物的外部因素，水体中微生物数量的增加最终会导致贝类体内微生物数量的增加。
3 结论
通过抽样检测贝类养殖围塘中水体和底泥的微生物含量，确定影响贝类微生物富集的直接因素。结果表明，养殖水体中粪大肠菌群和细菌总数的变化与贝类体内大肠杆菌含量存在一定的正相关，而底泥中微生物的变化对贝类富集大肠杆菌的影响并不直接。因此，水体中微生物的变化对贝类富集大肠杆菌的影响比底泥更为明显。在持续降雨期间，连续每天对养殖场泥蚶、缢蛏样品及水体进行微生物检测，结果表明持续降雨后遇到晴天，泥蚶富集微生物的能力加强，贝肉内大肠杆菌和菌落总数偏高。对缢蛏而言，在持续降雨期间其大肠杆菌数和菌落总数明显偏高，特别是在持续降雨后遇到晴天，菌落总数显著增长。
参考文献
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