【摘 要】
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目的探讨氯化锂对血管平滑肌细胞钙化的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人主动脉血管平滑肌细胞，用钙化培养基(无机磷浓度为3 mmol/L)建立平滑肌细胞钙化模型。药物处理组用氯化锂(10 mmol/L)预处理细胞4 h后加入3 mmol/L的无机磷，继续培养细胞数天后用茜素红染色检测细胞钙盐沉积水平，同时应用焦磷酸偶联酶反应底物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)消耗法，酶标仪(OD340)检测细胞
【机 构】
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北京医院 国家卫生健康委员会北京老年医学研究所 国家老年医学中心 国家卫生健康委员会老年医学重点实验室 100730,北京医院 国家卫生健康委员会北京老年医学研究所 国家老年医学中心 国家卫生健康委员
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目的探讨氯化锂对血管平滑肌细胞钙化的影响及其可能的作用机制。
方法体外培养人主动脉血管平滑肌细胞，用钙化培养基(无机磷浓度为3 mmol/L)建立平滑肌细胞钙化模型。药物处理组用氯化锂(10 mmol/L)预处理细胞4 h后加入3 mmol/L的无机磷，继续培养细胞数天后用茜素红染色检测细胞钙盐沉积水平，同时应用焦磷酸偶联酶反应底物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)消耗法，酶标仪(OD340)检测细胞外焦磷酸的分泌；实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测细胞中ankh基因的表达；采用慢病毒感染人主动脉平滑肌细胞的方法，建立对照细胞组和ankh敲低的实验细胞组，并观察其对细胞钙化的影响。
结果高磷细胞组钙化检测值为(65.00±2.11)ng/g，较对照细胞组(12.39±0.38)ng/g钙化水平明显升高(P<0.01)。氯化锂预处理细胞的钙化检测值为(24.92±1.87)ng/g，与高磷对照组(60.94±4.51)ng/g比较能显著抑制高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化(P<0.01)；氯化锂预处理明显上调细胞外液中焦磷酸的含量，基础条件下预处理组为(51.70±7.26)×10－3 mmol/g，对照组为(28.71±2.55)×10－3mmol/g(P<0.01)；高磷刺激下预处理组为(34.35±4.27)×10－3mmol/g，对照组为(20.89±4.93)×10－3mmol/g(P<0.05)，同时氯化锂预处理显著升高细胞ankh表达水平(P<0.01)；而敲低ankh使无机磷诱导的血管平滑肌细胞钙化程度显著加重，敲低ankh细胞钙化检测值为(71.73±2.45)ng/g，对照组为(56.19±3.59)ng/g(P<0.01)。
结论氯化锂通过上调平滑肌ANKH的表达，升高细胞外液中的焦磷酸水平，抑制高磷诱导下血管平滑肌细胞的钙化。
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