探讨β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路激活中的作用。
方法将人肺微血管内皮细胞以1×105个/ml的密度接种于6孔板(2 ml/孔)或培养瓶(4 ml/瓶)中，采用随机数字表法，将其分为5组(n＝20)：空质粒转染组(C组)、LPS＋空质粒转染组(LPS组)、盐酸戊乙奎醚＋LPS＋空质粒转染组(P＋LPS组)、LPS＋β-抑制蛋白-1短发夹RNA(shRNA)转染组(LPS＋shRNA组)和盐酸戊乙奎醚＋LPS＋β-抑制蛋白-1 shRNA转染组(P＋LPS＋shRNA组)。以空质粒1.5 μg或含15 nmol/L β-抑制蛋白-1 shRNA的质粒转染细胞后，孵育24 h时，LPS组和LPS＋shRNA组加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS孵育1 h；P＋LPS组和P＋LPS＋shRNA组于加入终浓度为2 μg/ml的盐酸戊乙奎醚，孵育1 h时加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS孵育1 h。采用流式细胞仪检测纤维状肌动蛋白(F-actin)表达水平，采用免疫荧光化学法检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达水平，采用Western blot法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达水平。采用RT-PCR法检测β-抑制蛋白-1 mRNA表达水平。
结果与C组比较，LPS组细胞F-actin、VE-cadherin和β-抑制蛋白-1 mRNA的表达下调，MLCK、p-ERK1/2和p-JNK的表达上调，P＋LPS组细胞p-ERK1/2和p-JNK表达上调(P<0.05)，其余指标表达差异无统计学意义(P>0.05)；与LPS组比较，P＋LPS组细胞F-actin、VE-cadherin和β-抑制蛋白-1 mRNA的表达上调，MLCK、p-ERK1/2和p-JNK的表达下调，LPS＋shRNA组细胞F-actin、VE-cadherin和β-抑制蛋白-1 mRNA的表达下调，MLCK和p-JNK的表达上调(P<0.05)；与P＋LPS组比较，P＋LPS＋shRNA组细胞F-actin、VE-cadherin和β-抑制蛋白-1 mRNA的表达下调，MLCK、p-ERK1/2和p-JNK的表达上调(P<0.05)。
结论盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞MAPK信号通路激活的机制部分与β-抑制蛋白-1表达上调有关。