人PTEN绿色荧光蛋白真核表达载体的构建及鉴定

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目的 构建人PTEN绿色荧光蛋白真核表达载体并进行鉴定.方法 参照PTEN基因全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自的酶切位点.从正常人胎盘组织中提取mRNA作为模板合成第一链,并扩增目的基因序列片段,经双酶切后定向克隆至绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1中,筛选阳性重组质粒,分别经双酶切、测序法对重组质粒进行鉴定.结果 双酶切和特异PCR结果表明克隆的基因片段约1.2 kb;测序法进一步证实该基因为PTEN编码基因,经NCBIBLAST分析与Gene Bank中基因序列完全相同.结论
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