【摘 要】
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目的 探讨miR-146调控Toll样受体2(TLR2)通路拮抗脂多糖(LPS)对滋养细胞损伤及其机制.方法 体外培养HTR-8/Svneo细胞,试验分为5组:对照组、LPS组(0.1 ng/L LPS)、LPS+miR-146 NC组、LPS+miR-146 mimics组、LPS+miR-146 mimics+Pam3CSK4(TLR2激活剂)组,转染24 h后,收集上清液用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素10(IL-10)浓度,通过实时
【机 构】
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新疆维吾尔自治区人民医院产科,新疆乌鲁木齐830001
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目的 探讨miR-146调控Toll样受体2(TLR2)通路拮抗脂多糖(LPS)对滋养细胞损伤及其机制.方法 体外培养HTR-8/Svneo细胞,试验分为5组:对照组、LPS组(0.1 ng/L LPS)、LPS+miR-146 NC组、LPS+miR-146 mimics组、LPS+miR-146 mimics+Pam3CSK4(TLR2激活剂)组,转染24 h后,收集上清液用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素10(IL-10)浓度,通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测miR-146表达,通过流式细胞术检测细胞凋亡情况,免疫印迹法(WB)检测凋亡细胞相关蛋白BCL2-相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)基因、裂解半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-Caspase 3)及TLR2通路相关蛋白表达.结果 与对照组相比,LPS组中miR-146表达、Bcl-2蛋白含量显著降低(P＜0.05);TNF-α、IL-1β、IL-10浓度,细胞凋亡率,Bax、cleaved-Caspase 3、TLR2、髓样分化因子88(MyD88)、磷酸化核转录因子-κB(p-NF-κB)/核转录因子-κB(NF-κB)蛋白含量显著升高(P＜0.05).与LPS组、LPS+miR-146 NC组相比,LPS+miR-146 mimics组miR-146表达、Bcl-2蛋白含量显著升高(P＜0.05);TNF-α、IL-1β、IL-10浓度,细胞凋亡率,Bax、cleaved-Caspase 3、TLR2、MyD88、p-NF-κB/NF-κB显著降低.与LPS+miR-146 mimics组相比,LPS+miR-146 mimics+Pam3CSK4组TLR2、MyD88、p-NF-κB/NF-κB表达显著升高(P＜0.05).结论 miR-146过表达可抑制脂多糖诱导的滋养细胞炎症损伤及过度凋亡,可能是通过抑制TLR2通路活化实现的.
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