【摘 要】
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背景:大肠埃希菌形成生物被膜引发难治性的慢性感染,严重威胁了人类的健康.pgaABCD操纵子是生物被膜形成的重要调节基因之一.目的:构建大肠埃希菌缺失菌株MG1655/△pga,并分别回补pgaA、pgaB、pgaC、pgaD,构建互补株△pga/pgaA、△pga/pgaB、△pga/pgaC、△pga/pgaD,观察缺失株、互补株的生物被膜形成能力、胞外多糖含量及菌株形态学特征,分析pga基因对生物被膜的调节作用.方法:在Lambda Red重组系统基础上,将pKD46辅助质粒转化入MG1655感受态
【机 构】
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新疆医科大学第五附属医院检验科,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830000;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,北京市102206;新疆医科大学,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830000
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背景:大肠埃希菌形成生物被膜引发难治性的慢性感染,严重威胁了人类的健康.pgaABCD操纵子是生物被膜形成的重要调节基因之一.目的:构建大肠埃希菌缺失菌株MG1655/△pga,并分别回补pgaA、pgaB、pgaC、pgaD,构建互补株△pga/pgaA、△pga/pgaB、△pga/pgaC、△pga/pgaD,观察缺失株、互补株的生物被膜形成能力、胞外多糖含量及菌株形态学特征,分析pga基因对生物被膜的调节作用.方法:在Lambda Red重组系统基础上,将pKD46辅助质粒转化入MG1655感受态细胞,获得MG1655/pKD46单克隆.pgaABCD打靶片段转入感受态细胞MG1655/pKD46,利用辅助质粒pCP20构建缺失株MG1655/△G16.以质粒pBR322作为回补载体,构建pBR322-pgaA、pgaB、pgaC、pgaD四个质粒,通过电转化的方式分别转入MG1655/△G16,获得相应的互补株.应用刚果红平板、结晶紫半定量法、透射电镜检测构建菌株生物被膜形成能力特性的变化,苯酚-硫酸法检测其胞外多糖的含量.结果 与结论:①缺失株生物被膜形成能力和胞外多糖含量显著降低(P ＜ 0.05),有细胞溃烂溶解现象,切片发现菌内空泡变性;②提示大肠埃希菌pgaABCD基因的缺失会影响生物被膜的特性,且pgaA、pgaB、pgaC、pgaD均参与生物被膜的形成,但不是唯一调控基因.
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