微小RNA-608在人骨髓间充质干细胞成骨与成脂肪分化动态平衡中的作用

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bbaaccd
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的

检测微小RNA(miRNA,miR)-608在人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)向成骨细胞和成脂肪细胞分化过程中的表达变化以及对hBMSCs向成骨细胞和成脂肪细胞分化的调控作用机制。

方法

利用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)分别检测hBMSCs向成骨细胞以及成脂肪细胞分化过程中miR-608的表达变化。细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验检测miR-608对hBMSCs增殖的影响。利用生物信息学软件分析miR-608的靶基因。利用双荧光素酶报告基因检测miR-608与靶基因的结合。利用蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-608对靶基因蛋白水平的表达变化。利用茜素红染色和油红O染色检测miR-608对hBMSCs向成骨细胞和成脂肪细胞分化的功能的影响。应用SPSS 17.0统计软件分析,数据以均值±标准差(Mean±SD)表示。两样本均数比较采用独立样本t检验,多样本均数比较采用单因素方差分析。

结果

FQ-PCR检测显示在hBMSCs向成骨细胞分化第3天miR-608表达量下降,与对照组(1.00±0.11)比较,成骨诱导分化组(0.20±0.09)中miR-608的表达显著性降低,差异有统计学意义(t=9.479,P<0.01)。FQ-PCR检测发现在hBMSCs向成脂肪细胞分化第3天表达量升高,与对照组(1.00±0.09)比较,成骨诱导分化组(4.36±0.55)中miR-608的表达显著性降低,差异有统计学意义(t=10.442,P<0.05)。CCK-8和克隆形成实验检测发现miR-608抑制hBMSCs的增殖。生物信息学软件分析miR-608与Runt相关基因2(Runx2)以及音猬因子(SHH) 3’端非编码区(3’UTR)区有结合位点。双荧光素酶报告基因检测可见与miR-608 mimics NC组(1.00±0.22)比较,miR-608 mimcs组(0.21±0.11)荧光素酶活性显著降低,差异有统计学意义(t=5.542,P<0.05)。Western blot检测发现miR-608可以抑制Runx2和SHH蛋白水平的表达。茜素红染色检测显示较miR-608 mimics NC组(1.00±0.14)比较,miR-608 mimcs组(0.32±0.12)茜素红染色显著降低,差异有统计学意义(t=6.387,P<0.05)。油红O染色检测发现与miR-608 mimics NC组(19.20±2.34)比较,miR-608 mimcs组(32.12±6.25)油红O细胞阳性数目显著升高,差异有统计学意义(t=3.353,P<0.05)。

结论

miR-608在hBMSCs向成骨细胞分化过程中表达降低,而向成脂肪细胞分化过程中升高。miR-608抑制hBMSCs的增殖。miR-608通过靶向Runx2和SHH mRNA 3’UTR区调控Runx2和SHH蛋白水平的表达。miR-608抑制hBMSCs向成骨细胞分化而促进hBMSCs向脂肪细胞分化。

其他文献
目的观察苍术素对人骨关节炎(OA)软骨细胞的影响。方法分别用10、50、100 mg/kg的苍术素预处理人OA软骨细胞,随后用IL-1β(10 μg/L)刺激24 h。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测环氧合酶2(COX2)和一氧化氮(NO)的表达量;通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)测量基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-13、COX2和NO的基因表达;蛋白质印迹法(W
目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路通过缺血后处理激活对肺缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法30只无特定病原体动物(SPF)级SD大鼠随机分为3组(n=10):缺血再灌注损伤(IRI)手术处理组、Sham假手术组及缺血后处理组。建立肺脏缺血再灌注损伤大鼠模型及缺血后处理大鼠模型,缺血后处理组建模后进行缺血后处理,Sham假手术组除不用无损伤动脉夹钳夹左侧肺脏外,其他一切步骤与缺血再灌
目的探讨同源异型框基因翻译基因间RNA(LincRNA-HOTAIR)在人肠癌组织的表达及其与细胞增殖、迁移能力表型的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测41例肠癌患者的癌组织、癌旁组织和肠癌细胞株LoVo中HOTAIR的相对表达;合成针对HOTAIR的小干扰RNA转染并下调LoVo细胞中HOTAIR的表达水平。采用噻唑蓝(MTT)实验、划痕实验和Transwl
期刊
期刊
目的建立大鼠蛛网膜下腔出血透明颅窗模型对蛛网膜下腔出血后脑皮层血流进行连续7 d动态监测。方法30只SD雄性大鼠随机分为正常对照组(n=10)、盐水组(n=10)和注血组(n=10);枕大池二次注入自体非抗凝尾动脉血0.3 ml并使用硅基聚二甲基硅氧烷制成的透明柔性材料,建立蛛网膜下腔出血透明颅窗观察模型;运用激光散斑成像系统监测颅窗内脑皮层血流的7 d动态变化。应用SPSS 20.0统计软件分析
目的采用脂肪干细胞(ADSCs)复合喷墨全包芯骨支架修复兔桡骨缺损。方法成功成骨诱导的ADSCs与喷墨全包芯骨支架复合构建细胞支架复合体(A组),ADSCs/聚乳酸-乙醇酸(PLGA)/β磷酸三钙(β-TCP)复合体(B组)、空白缺损(C组)作为对照。采用随机区组设计植入36只兔桡骨1.5 cm缺损部位,术后12、24、48周取材,进行相关分析。结果影像学、大体观察、组织学检测示A组骨缺损完全修复
目的观察高比例ω-3/ω-6脂肪酸对创伤性颅脑损伤(TBI)后炎性反应和神经细胞凋亡的影响。方法33只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为3组:假手术组、低比例组和高比例组。采用自由落体打击法制作TBI模型,伤后喂食无脂饲料并用相应ω-3/ω-6的混合油灌胃。采用免疫荧光、原位缺口末端标记法(TUNEL)和蛋白质印迹法(Western blot)等方法观察伤后第5天小胶质/巨噬细胞极化、核
目的探讨长链非编码RNA linc00996在胶质瘤中的表达、调控胶质瘤细胞侵袭、转移分子功能及其与患者预后的关系。方法肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中比较linc00996在胶质瘤患者肿瘤组织和正常脑组织中的差异表达。同时选取河南省人民医院手术治疗的21例胶质瘤患者,术中留取肿瘤组织和正常脑组织,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测上述组织中linc00996的表达水平。合成针对lin
目的检测兔血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量变化,观察通腑泄热法中药对兔肝缺血再灌注损伤的保护作用。方法制备兔肝缺血再灌注模型30例,随机分为3组,即中药组(n=10例)和假手术组(n=10例),对照组(n=10例),分别按照于术前、术中和术后5 d取各组家兔的血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中TNF-α、IL-6的含量变化。结果术前、术中和术后5