检测微小RNA(miRNA，miR)-608在人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)向成骨细胞和成脂肪细胞分化过程中的表达变化以及对hBMSCs向成骨细胞和成脂肪细胞分化的调控作用机制。
方法利用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)分别检测hBMSCs向成骨细胞以及成脂肪细胞分化过程中miR-608的表达变化。细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验检测miR-608对hBMSCs增殖的影响。利用生物信息学软件分析miR-608的靶基因。利用双荧光素酶报告基因检测miR-608与靶基因的结合。利用蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-608对靶基因蛋白水平的表达变化。利用茜素红染色和油红O染色检测miR-608对hBMSCs向成骨细胞和成脂肪细胞分化的功能的影响。应用SPSS 17.0统计软件分析，数据以均值±标准差(Mean±SD)表示。两样本均数比较采用独立样本t检验，多样本均数比较采用单因素方差分析。
结果FQ-PCR检测显示在hBMSCs向成骨细胞分化第3天miR-608表达量下降，与对照组(1.00±0.11)比较，成骨诱导分化组(0.20±0.09)中miR-608的表达显著性降低，差异有统计学意义(t＝9.479，P<0.01)。FQ-PCR检测发现在hBMSCs向成脂肪细胞分化第3天表达量升高，与对照组(1.00±0.09)比较，成骨诱导分化组(4.36±0.55)中miR-608的表达显著性降低，差异有统计学意义(t＝10.442，P<0.05)。CCK-8和克隆形成实验检测发现miR-608抑制hBMSCs的增殖。生物信息学软件分析miR-608与Runt相关基因2(Runx2)以及音猬因子(SHH) 3’端非编码区(3’UTR)区有结合位点。双荧光素酶报告基因检测可见与miR-608 mimics NC组(1.00±0.22)比较，miR-608 mimcs组(0.21±0.11)荧光素酶活性显著降低，差异有统计学意义(t＝5.542，P<0.05)。Western blot检测发现miR-608可以抑制Runx2和SHH蛋白水平的表达。茜素红染色检测显示较miR-608 mimics NC组(1.00±0.14)比较，miR-608 mimcs组(0.32±0.12)茜素红染色显著降低，差异有统计学意义(t＝6.387，P<0.05)。油红O染色检测发现与miR-608 mimics NC组(19.20±2.34)比较，miR-608 mimcs组(32.12±6.25)油红O细胞阳性数目显著升高，差异有统计学意义(t＝3.353，P<0.05)。
结论miR-608在hBMSCs向成骨细胞分化过程中表达降低，而向成脂肪细胞分化过程中升高。miR-608抑制hBMSCs的增殖。miR-608通过靶向Runx2和SHH mRNA 3’UTR区调控Runx2和SHH蛋白水平的表达。miR-608抑制hBMSCs向成骨细胞分化而促进hBMSCs向脂肪细胞分化。