【摘 要】
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目的对新发现的华支睾吸虫( Clonorchis sinensis )的Rho GTPase样基因进行克隆、表达和免疫学鉴定.方法将用生物信息学方法识别的华支睾吸虫cDNA质粒文库中的Rho GTPase样基
【基金项目】
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广东省科技厅科技计划;国家自然科学基金;广东省科技攻关项目
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目的对新发现的华支睾吸虫( Clonorchis sinensis )的Rho GTPase样基因进行克隆、表达和免疫学鉴定.方法将用生物信息学方法识别的华支睾吸虫cDNA质粒文库中的Rho GTPase样基因的完整编码序列(CDS)克隆到原核表达质粒pET-30 a(+)中,在大肠埃希菌BL21中用IPTG诱导表达.表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blotting)进行分析,并用镍离子金属螯合亲和层析柱进行纯化.结果华支睾吸虫的Rho GTPase样基因的完整阅读框含576个碱基,编码192个氨基酸,理论分子量为21.7kDa. PCR、双酶切及DNA测序的结果均表明重组质粒pET-30a(+)-Rho GTPase构建成功.SDS-PAGE结果表明Rho GTPase基因在大肠埃希菌BL21中获得了高效表达, 重组蛋白可被感染华支睾吸虫的猫血清识别, 表明其具有免疫反应性.亲和层析获得了高纯度的蛋白.结论华支睾吸虫的Rho GTPase样基因可在原核系统中获得有免疫学活性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.
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