【摘 要】
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目的筛选能有效裂解结核分枝杆菌的噬菌体,并了解其生物学和遗传学信息。方法双层平板法扩增噬菌体,观察噬菌斑形态;电镜观察噬菌体颗粒形态;单斑法检测噬菌体宿主谱。采用λ
【机 构】
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重庆医科大学附属第一医院呼吸与危重症医学科,成都市第三人民医院呼吸内科,重庆市长寿区人民医院呼吸内科
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目的筛选能有效裂解结核分枝杆菌的噬菌体,并了解其生物学和遗传学信息。方法双层平板法扩增噬菌体,观察噬菌斑形态;电镜观察噬菌体颗粒形态;单斑法检测噬菌体宿主谱。采用λ噬菌体提取试剂盒提取噬菌体DNA,鸟枪法测序,得到的DNA序列用Phred/PhraD/Consedh软件包组装,拼接重叠群,PCR扩增重叠群缺口。采用DNAStar软件包、Glimmer3.0基因预测软件、Promoter prediction/Prokaryotic程序进行基因成分分析,基因功能预测,启动子区预测,并同时对Leo作共线性分析及构建系统进化树。结果噬菌体Leo由多面体头部和尾部构成,头部直径(70.0±3.0)nm,尾长(211.0±31.7)nm。其噬菌斑清晰透明,能裂解不同的结核分枝杆菌临床分离株。Leo基因组全长39 981bp,GC含量66.86%,含3个可能的启动子区,不含串联重复序列和tRNA区。Leo含59个基因,gene32编码整合酶,不含编码阻遏蛋白的基因和不利基因,Leo与BPs和Angel相似性最高。结论噬菌体Leo是一株不含不利基因的裂解性噬菌体,能裂解结核分枝杆菌,可以作为鸡尾酒疗法的候选噬菌体。
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