【摘 要】
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目的 探讨应用RNA干扰(RNAi)技术沉默生长因子结合蛋白2相耦联的接头蛋白1(Gab1)基因,使其在体外抑制血管生成.方法 观察人主动脉血管内皮细胞株(EA.hy926)的生长及形态;构建
【机 构】
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浙江大学衢州医院血管外科, 浙江衢州,324000
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目的 探讨应用RNA干扰(RNAi)技术沉默生长因子结合蛋白2相耦联的接头蛋白1(Gab1)基因,使其在体外抑制血管生成.方法 观察人主动脉血管内皮细胞株(EA.hy926)的生长及形态;构建靶向Gab1的小干扰RNA(siRNA-Gab1)表达慢病毒转染EA.hy926细胞;通过Western blot和反转录-聚合酶连反应(RT-PCR)分别检测Gab1蛋白及Gab1 mRNA的表达水平,采用表面培养法构建体外血管生成三维培养模型,观察转染后EA.hy926细胞体外形成血管样结构的数目和长度.结果 与空白组及阴性对照组比较,siRNA-Gab1干扰组EA.hy926细胞形态变化明显,由长梭形逐渐变成星形或多角形;siRNA-Gab1干扰组Gab1蛋白及Gab1 mRNA(0.291 ±0.004)的表达水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);siRNA-Gab1干扰组三维培养模型中血管样结构的数量(15.600±2.608)个和长度(2.896 00 ±0.736 97) mm均明显减少;其差异有统计学意义(P＜0.05).而阴性和空白对照组之间比较,细胞形态均呈梭形,Gab1蛋白及Gab1 mRNA(1.001±0.050、1.063 ±0.040)的表达水平、三维培养模型中血管样结构的数量(35.800±2.775)、(38.200±2.588)个和长度(6.3000±0.912 8)、(6.466±1.2529) mm差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 siRNA-Gab1能够抑制EA.hy926细胞中Gab1的mRNA及其蛋白的表达,从而在体外抑制血管生成.
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