目的建立了一种新的HPLC-PAD法测定盐酸大观霉素含量及其有关物质的分析方法。方法采用Apollo C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以100mmol/L三氟乙酸为流动相,流速为1.0mL/min,柱温为30℃,柱后衍生氢氧化钠溶液浓度为21g/L,流速为0.5mL/min。脉冲安培检测器,工作电极为金电极(3mm),四电位工作模式。结果盐酸大观霉素在0.15~150μg/mL(r=0.9999)内线性关系良好,杂质A在0.05~50μg/mL(r=0.9999)内线性关系良好,杂质B在0.5~50μg/mL(r=1.0000)内线性关系良好,杂质C在0.5~50μg/mL(r=1.0000)内线性关系良好。大观霉素、杂质A、杂质B和杂质C的检测限分别为1.5、1.0、2.0和3.0ng。大观霉素、杂质A、杂质B和杂质C的精密度分别为1.5%、1.1%、1.6%和1.8%。大观霉素的回收率为96.7%~102.5%。结论该方法准确、灵敏,重复性和耐用性好,可用于盐酸大观霉素及其有关物质的实验室日常测定。