【摘 要】
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目的:分离、纯化培养大鼠BMSCs,对其生物学特性进行检测和鉴定。方法:取大鼠长骨中的骨髓组织,以淋巴分离液梯度离心获得有核细胞层,分别以本实验室BMSCs专用培养基接种培养,
【机 构】
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广东省中医院神经外科,南方医科大学珠江医院神经医学研究所
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目的:分离、纯化培养大鼠BMSCs,对其生物学特性进行检测和鉴定。方法:取大鼠长骨中的骨髓组织,以淋巴分离液梯度离心获得有核细胞层,分别以本实验室BMSCs专用培养基接种培养,经多次换液得到较纯的BMSCs,倒置相差显微镜下观察细胞形态。选择CD44、CD31、CD45、CD29、CD34及flk1,应用流式细胞仪对细胞的表面抗原标志进行检测。结果:倒置相差显微镜观察发现,接种后的24 h内,有核细胞(包含骨髓基质细胞)开始贴壁,4￣7 d,贴壁细胞出现明显分裂增殖,10￣14 d细胞增殖旺盛,可见明显的细胞克隆团,贴壁牢靠。20 d左右,在本实验室专用BMSCs培养基培养下,绝大多数细胞逐渐分化呈梭形、三角形或多角形,核为圆形或类圆形、居中,这些细胞发出的突起逐渐生长延伸并彼此相连,形态学上具有神经系细胞的明显特征。细胞表面抗原检测显示所培养的BMSCs为:CD34-、CD45-、CD31-、flk1-、CD29+、CD44+,与文献报道一致。结论:所采用的细胞分离培养方法简便可行,所获得的细胞其表型特征与文献报道一致,确为BMSCs。
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