【摘 要】
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目的 探讨乌司他丁(UTI)对巨噬细胞焦亡的作用。方法 分离小鼠骨髓细胞,应用小鼠巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)诱导分化为巨噬细胞。将细胞分为对照组、UTI组、模型组和模型+UT
【机 构】
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暨南大学附属河源医院重症医学科,广州军区总医院重症医学科
【基金项目】
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国家自然科学基金(81471839,81671896);广东省科技计划项目(2017A020215055)~~
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目的 探讨乌司他丁(UTI)对巨噬细胞焦亡的作用。方法 分离小鼠骨髓细胞,应用小鼠巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)诱导分化为巨噬细胞。将细胞分为对照组、UTI组、模型组和模型+UTI组4组。UTI组和模型+UTI组在建模前给予1000U/ml乌司他丁预处理,其余两组给予等量PBS。模型组和模型+UTI组先用脂多糖(LPS)100ng/ml刺激培养4h,再加入10μmol/L尼日利亚菌素(Nigericin)继续刺激2h。对照组及UTI组在此期间仅给予等体积PBS。采用噻唑蓝(MTT)法评价各组细胞活力;应用分光光度法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率;Western blotting检测半胱天冬酶-1(caspase-1)及Gasdermin D蛋白(GSDMD)表达变化;应用RT-qPCR检测白细胞介素(IL)-1β、IL-18 mRNA水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清IL-1β、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6水平。结果 与模型组比较,乌司他丁预处理可明显提高LPS/Nigericin刺激后巨噬细胞存活率(73.4%vs.86.3%,P<0.05),降低LDH释放率(22.45%vs.14.80%,P<0.05),降低caspase-1和GSDMD片段化水平,降低IL-1β、IL-18 mRNA水平及蛋白分泌量,降低细胞上清TNF-α(311.3+33.02 pg/ml vs.206.1+28.84pg/ml,P<0.05)和IL-6水平(212.6+32.72 pg/mlvs.143.77+6.36 pg/ml,P<0.05)。结论 乌司他丁可抑制巨噬细胞焦亡,降低炎症反应。
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