【摘 要】
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建立了糖化酶中葡萄糖苷转移酶活性测定的高效液相色谱方法。以麦芽糖为底物,阿卡波糖为抑制剂,在37℃、pH=4.8醋酸缓冲液介质中葡萄糖苷转移酶作用下将麦芽糖转化为三糖。采
【机 构】
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建立了糖化酶中葡萄糖苷转移酶活性测定的高效液相色谱方法。以麦芽糖为底物,阿卡波糖为抑制剂,在37℃、pH=4.8醋酸缓冲液介质中葡萄糖苷转移酶作用下将麦芽糖转化为三糖。采用SUGAR SH1011色谱柱(300mm×8.0 mm,6μm)分离,以0.01 mol/L硫酸水溶液为流动相,流速0.6 mL/min,用示差折光检测器检测测定三糖的转化量,间接测定葡萄糖苷转移酶的活性。对色谱条件、底物浓度、抑制剂用量及培养时间等条件进行了系统考察。在优化的条件下,三糖在0.1~10 g/L范围内线性关系良好(r=0.999 8),葡萄糖苷转移酶活性检出限和定量限分别为0.013 U和0.043 U,6次平行测定的相对标准偏差(RSD)为0.63%。在优化条件下测定了不同批次糖化酶中葡萄糖苷转移酶的活性,结果良好。该方法操作简便,稳定性高,可用于葡萄糖生产原料糖化酶中葡萄糖苷转移酶活性的测定。
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