【摘 要】
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目的:分析黑色素瘤细胞内BRAF和NRAS基因表达与细胞增殖的关系,以初步探讨BRAF和NRAS基因调控黑色素瘤细胞的作用。方法:原代培养人肢端黑色素瘤细胞,以培养第3代细胞为目的
【机 构】
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深圳市第六人民医院肿瘤科,中山大学肿瘤防治中心生物治疗中心
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目的:分析黑色素瘤细胞内BRAF和NRAS基因表达与细胞增殖的关系,以初步探讨BRAF和NRAS基因调控黑色素瘤细胞的作用。方法:原代培养人肢端黑色素瘤细胞,以培养第3代细胞为目的细胞。取培养6、12、24h和48h时的第3代细胞,采用荧光定量PCR检测细胞内BRAF和NRASmRNA的转录水平,采用Western Blot检测细胞内BRAF和NRAS蛋白表达水平,采用BrdU掺入实验检测细胞的增殖情况。结果:第12小时微孔内总DNA量、总BRAF、NRAS mRNA量和蛋白表达量均显著高于第6小时的量(P=0.003,P=0.017,P=0.004,P=0.023,P=0.042);第24小时微孔内总DNA量、总BRAF和NRAS mRNA和蛋白表达量显著高于第12小时的量(P=0.012,P=0.007,P=0.015,P=0.009,P=0.043);第48小时微孔内总DNA量、BRAF和NRAS mRNA量和总BRAF和NRAS蛋白量显著高于第24小时的量(P=0.032,P=0.026,P=0.042,P=0.006,P=0.012。结论:黑色素瘤细胞内BRAF和NRAS mRNA量和蛋白表达量与细胞增殖呈正相关性。
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