PIK3CA基因RNA干扰慢病毒载体的构建和鉴定

来源 :军医进修学院学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangyongqihx
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目的构建靶向PIK3CA(P110α)基因的RNA干扰慢病毒载体。方法针对PIK3CA—mRNA(NM_006218)设计4个RNA干扰靶点序列和一个阴性对照靶点,构建慢病毒转移质粒pGCL—GFP。构建成功的RNA干扰质粒与PIK3CA表达质粒共转染293T细胞,荧光显微镜下观测转染效果,Western Blot检测PIK3CA蛋白表达,筛选出干扰效果最好的RNA干扰质粒。将该质粒与两种辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒并检测其滴度。结果4个靶点和阴性对照靶点的RNA干扰质粒均构建成功
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