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目的利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测腺病毒、合胞病毒和博卡病毒的方法。方法从Gen Bank随机下载腺病毒、合胞病毒和博卡病毒的目的基因,通过MEGA分析,利用Primer Express3.0软件设计三对引物及其相应的Taqman探针,利用一步法RT-PCR来建立和优化反应体系。10倍稀释阳性对照,来检验建立体系的灵敏度和重复性。利用具有相似临床症状的呼吸道病毒检验建立体系的特异性。结果建立了一个单管对腺病毒、呼吸道合胞病毒和博卡病毒进行检测的三重荧光RT-PCR反应体系。该体系的检测灵敏度为102 copies/μl,扩增效率分别为92.24%、96.95%和99.70%,标准曲线的相关系数大于99%,重复性变异系数<3.5%,特异性实验未发现有非特异性扩增。结论建立的三重荧光可以快速、准确地检测腺病毒、合胞病毒和博卡病毒。