【摘 要】
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目的 利用原核表达系统,表达了GⅡ.2型诺如病毒VP1蛋白,优化诱导条件并进行蛋白的纯化. 方法 扩增诺如病毒的VP1基因,克隆至pET32a(+)载体,构建重组质粒pET32a-VP1.将pET32a-
【机 构】
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吉林农业大学动物科技学院,吉林长春130000;军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所;延边大学医学院;温州大学病毒学研究所
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目的 利用原核表达系统,表达了GⅡ.2型诺如病毒VP1蛋白,优化诱导条件并进行蛋白的纯化. 方法 扩增诺如病毒的VP1基因,克隆至pET32a(+)载体,构建重组质粒pET32a-VP1.将pET32a-VP1转化至大肠埃希菌BL21(DE3),加入IPTG进行诱导表达并优化诱导条件.利用His标签镍离子蛋白纯化柱纯化表达蛋白,SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度. 结果 成功扩增大小为1 659 bp的诺如病毒VP1基因.PCR检测重组质粒pET32a-VP1构建成功.将重组质粒转化至BL21(DE3),IPTG诱导表达70×10 3的VP1重组蛋白,优化的最佳诱导表达条件为37℃,0.6mmol/L IPTG诱导5h.重组蛋白以包涵体的形式表达,并SDS-PAGE鉴定镍柱纯化产物为单一电泳条带的目的蛋白. 结论 利用原核表达系统成功构建了重组质粒pET32a-VP1,并表达纯化了诺如病毒VP1重组蛋白,为单克隆及多克隆抗体的制备、检测试剂盒以及新型疫苗的研发奠定了基础.
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