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摘 要 目的：观察利疸康颗粒对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)所致大鼠急性黄疸模型的退黄降酶作用。方法：将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、利疸康颗粒治疗组。中毒48小时腹主动脉取血，检测数据以平均值±标准差表示，采用方差分析，相关分析进行统计学处理。结果：Wister大鼠经ANIT染毒后，经利疸康治疗后，生化指标均有所下降。结论：药对ANIT诱导的肝毒性损伤有明显恢复作用。
关键词 ANIT 肝损伤 利疸康
肝毒性损伤在临床工作中经常会遇到，是严重危害人民健康的基础性病变。本实验以大鼠为研究对象，探讨α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导肝毒性损伤的机理，观察大鼠血清ALP、AKP、TBIL的变化，同时研究中药利疸康在ANIT诱导肝毒性损伤中有何作用。
材料与方法
实验动物：健康雄性Wister大鼠36只，清洁级，体重200～250g，由长春医学动物实验中心提供。
主要试剂和仪器：ANIT(异硫氰酸α-萘酯)系Sigma产品；肝功测定试剂盒均由长春汇力生物工程技术开发中心提供；利疸康颗粒：长春中医药大学药剂实验室生产；自动生化分析仪由日本日立公司株氏会社生产，日立7070型；电子体重秤由北京科奥公司生产；离心机：北京医用仪器厂生产。
药物制备：取利疸康颗粒加蒸馏水溶解，配成4.05g/kg混悬液。取ANIT2g，加热溶于100ml色拉油中，浓度2%（W/V）。
造模：将实验动物（大鼠）随机分为三组，空白对照组（A）、模型对照组（B）、利疸康颗粒对照组（C），每组12只大鼠。除正常组外，其余两组先取ANIT2g，加热溶于100ml色拉油中，浓度2%W/V，备用。造模时，每只大鼠每kg体重给予ANIT100mg，一次性灌胃中毒。所有动物（包括正常组）在ANIT中毒前及处死前分别禁食18小时，自由饮水。ANIT中毒48小时后，戊巴比妥麻醉，腹主动脉采血，用离心机分离血清后，测定各项生化指标。C组灌胃相应剂量药物5次，即中毒前2次，中毒后6小时1次，中毒第2天2次。A、B组同时灌胃相应体积的生理盐水，C组（利疸康颗粒组）给予4.05g/kg体重混悬液。测定大鼠TBIL、ALT、AST、ALP、GGT，比较各组动物上述指标的差异，并用t检验分析。
肝功能的血清生化指标测定：血清丙氨酸氨基转移酶-赖氏比色法，血清碱性磷酸酶-磷酸苯二钠法，血清总胆红素-甲醇法。
统计学方法：采用SPSS10.0统计学软件进行统计分析，结果均以X[TX-]±S表示，组间采用t检验。
实验结果
实验大鼠血清生化指标的变化：①血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）：Wister大鼠经ANIT染毒后48小时，ALT迅速升高，是空白组的5.36倍(P<0.01)，而利疸康治疗组ALT下降更加迅速，与模型组比较差异有显著性(P<0.01)，而模型组与空白组差异有显著性(P<0.01)。②血清碱性磷酸酶(AKP)：Wister大鼠染毒48小时后，AKP增加与ALT 相似，是空白组的3.15倍(P<0.01)。而利疸康治疗组AKP下降更加迅速，与模型组比较差异有显著性(P<0.01)，而模型组与空白组差异有显著性(P<0.01)。③血清总胆红素（TBIL）：Wister大鼠经ANIT染毒48小时后，TBIL明显增加，接近空白组的８倍(P<0.01)。而利疸康治疗组TBIL下降更加迅速，与模型组比较差异有显著性(P<0.01)，而模型组与空白组差异有显著性(P<0.01)。
讨 论
自 1952年一位美国专家首次用ANIT复制出肝损伤模型以来，被广泛地用于肝损伤模型的复制［1］。ANIT诱导大鼠肝损伤模型的适用性肝毒性损伤模型的建立是完成本实验的基础。本实验以血清ALT、AKP、TBIL改变为指标，确认肝损伤是否形成，并以此进行动态观察。利用ANIT诱导动物肝损伤模型在国内已有报道［2］。
研究发现，ANIT诱导的肝损伤表现为肝实质细胞、胆管上皮细胞坏死，汇管区大量中性粒细胞浸润。ANIT诱导的肝损伤是中性粒细胞依赖性的肝损伤，ANIT在体外能使中性粒细胞活化，进一步研究发现由活化中性粒细胞释放的细胞因子如组织蛋白酶G、弹力蛋白酶对体外培养的肝细胞具有毒性作用。
利疸康颗粒主要药物成分为大黄。大黄“荡涤肠胃，推陈致新”，具有攻积通便、活血祛瘀、利胆退黄、清泻湿热之功效。现代医学实验证明，大黄能改善微循环，增加肝血流量，促进胆囊收缩，松弛胆总管括约肌，疏通毛细胆管，并具有免疫调控、稳定机体内环境、修复肝细胞等作用。大黄既能清热利湿，又能化瘀通下，使瘀有所破，湿有所祛，热有所走，为方中君药。现代药理研究证实，大黄中所含的大黄素与大黄酸能促进胆红素、胆汁酸的分泌，使奥狄括约肌收缩，胆汁排泄增高；同时，大黄还能阻断肠肝循环，减轻肝细胞变性与坏死［3］。ANIT于大鼠中毒48小时血清BILT达高峰，72小时开始下降。本次实验对每只大鼠每kg体重给予ANIT100mg，一次性灌胃中毒。48小时大鼠血清ALT、AKP、TBIL明显升高(P<0.01)，光镜下可见肝细胞变性坏死，汇管区大量炎细胞浸润，胆管上皮損伤伴增生性改变。
大鼠经ANIT诱导产生肝损伤，经中药利疸康颗粒治疗后，血清ALT、AKP、TBIL明显下降。光镜下，肝细胞、胆管上皮细胞变性坏死程度明显减轻，汇管区中性粒细胞浸润减少。说明中药利疸康颗粒对ANIT诱导的肝损伤具有保护作用。
参考文献
1 方厚华.医学实验动物模型.北京：军事医学科学院出版社，2001：325.
2 杨新波，黄正明，曹文斌，等.CCl4、D-Gal、ANIT对化学性肝损伤小鼠血清生化指标的影响.世界华人消化杂志，1998，6（1）：19-21.
3 张照兰，郭胜，郭勇义.退黄合剂对 ANIT诱发肝内胆汁瘀积大鼠的影响.中国中医药信息杂志，2004，11（12）：1052-1053.
关键词 ANIT 肝损伤 利疸康
肝毒性损伤在临床工作中经常会遇到，是严重危害人民健康的基础性病变。本实验以大鼠为研究对象，探讨α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导肝毒性损伤的机理，观察大鼠血清ALP、AKP、TBIL的变化，同时研究中药利疸康在ANIT诱导肝毒性损伤中有何作用。
材料与方法
实验动物：健康雄性Wister大鼠36只，清洁级，体重200～250g，由长春医学动物实验中心提供。
主要试剂和仪器：ANIT(异硫氰酸α-萘酯)系Sigma产品；肝功测定试剂盒均由长春汇力生物工程技术开发中心提供；利疸康颗粒：长春中医药大学药剂实验室生产；自动生化分析仪由日本日立公司株氏会社生产，日立7070型；电子体重秤由北京科奥公司生产；离心机：北京医用仪器厂生产。
药物制备：取利疸康颗粒加蒸馏水溶解，配成4.05g/kg混悬液。取ANIT2g，加热溶于100ml色拉油中，浓度2%（W/V）。
造模：将实验动物（大鼠）随机分为三组，空白对照组（A）、模型对照组（B）、利疸康颗粒对照组（C），每组12只大鼠。除正常组外，其余两组先取ANIT2g，加热溶于100ml色拉油中，浓度2%W/V，备用。造模时，每只大鼠每kg体重给予ANIT100mg，一次性灌胃中毒。所有动物（包括正常组）在ANIT中毒前及处死前分别禁食18小时，自由饮水。ANIT中毒48小时后，戊巴比妥麻醉，腹主动脉采血，用离心机分离血清后，测定各项生化指标。C组灌胃相应剂量药物5次，即中毒前2次，中毒后6小时1次，中毒第2天2次。A、B组同时灌胃相应体积的生理盐水，C组（利疸康颗粒组）给予4.05g/kg体重混悬液。测定大鼠TBIL、ALT、AST、ALP、GGT，比较各组动物上述指标的差异，并用t检验分析。
肝功能的血清生化指标测定：血清丙氨酸氨基转移酶-赖氏比色法，血清碱性磷酸酶-磷酸苯二钠法，血清总胆红素-甲醇法。
统计学方法：采用SPSS10.0统计学软件进行统计分析，结果均以X[TX-]±S表示，组间采用t检验。
实验结果
实验大鼠血清生化指标的变化：①血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）：Wister大鼠经ANIT染毒后48小时，ALT迅速升高，是空白组的5.36倍(P<0.01)，而利疸康治疗组ALT下降更加迅速，与模型组比较差异有显著性(P<0.01)，而模型组与空白组差异有显著性(P<0.01)。②血清碱性磷酸酶(AKP)：Wister大鼠染毒48小时后，AKP增加与ALT 相似，是空白组的3.15倍(P<0.01)。而利疸康治疗组AKP下降更加迅速，与模型组比较差异有显著性(P<0.01)，而模型组与空白组差异有显著性(P<0.01)。③血清总胆红素（TBIL）：Wister大鼠经ANIT染毒48小时后，TBIL明显增加，接近空白组的８倍(P<0.01)。而利疸康治疗组TBIL下降更加迅速，与模型组比较差异有显著性(P<0.01)，而模型组与空白组差异有显著性(P<0.01)。
讨 论
自 1952年一位美国专家首次用ANIT复制出肝损伤模型以来，被广泛地用于肝损伤模型的复制［1］。ANIT诱导大鼠肝损伤模型的适用性肝毒性损伤模型的建立是完成本实验的基础。本实验以血清ALT、AKP、TBIL改变为指标，确认肝损伤是否形成，并以此进行动态观察。利用ANIT诱导动物肝损伤模型在国内已有报道［2］。
研究发现，ANIT诱导的肝损伤表现为肝实质细胞、胆管上皮细胞坏死，汇管区大量中性粒细胞浸润。ANIT诱导的肝损伤是中性粒细胞依赖性的肝损伤，ANIT在体外能使中性粒细胞活化，进一步研究发现由活化中性粒细胞释放的细胞因子如组织蛋白酶G、弹力蛋白酶对体外培养的肝细胞具有毒性作用。
利疸康颗粒主要药物成分为大黄。大黄“荡涤肠胃，推陈致新”，具有攻积通便、活血祛瘀、利胆退黄、清泻湿热之功效。现代医学实验证明，大黄能改善微循环，增加肝血流量，促进胆囊收缩，松弛胆总管括约肌，疏通毛细胆管，并具有免疫调控、稳定机体内环境、修复肝细胞等作用。大黄既能清热利湿，又能化瘀通下，使瘀有所破，湿有所祛，热有所走，为方中君药。现代药理研究证实，大黄中所含的大黄素与大黄酸能促进胆红素、胆汁酸的分泌，使奥狄括约肌收缩，胆汁排泄增高；同时，大黄还能阻断肠肝循环，减轻肝细胞变性与坏死［3］。ANIT于大鼠中毒48小时血清BILT达高峰，72小时开始下降。本次实验对每只大鼠每kg体重给予ANIT100mg，一次性灌胃中毒。48小时大鼠血清ALT、AKP、TBIL明显升高(P<0.01)，光镜下可见肝细胞变性坏死，汇管区大量炎细胞浸润，胆管上皮損伤伴增生性改变。
大鼠经ANIT诱导产生肝损伤，经中药利疸康颗粒治疗后，血清ALT、AKP、TBIL明显下降。光镜下，肝细胞、胆管上皮细胞变性坏死程度明显减轻，汇管区中性粒细胞浸润减少。说明中药利疸康颗粒对ANIT诱导的肝损伤具有保护作用。
参考文献
1 方厚华.医学实验动物模型.北京：军事医学科学院出版社，2001：325.
2 杨新波，黄正明，曹文斌，等.CCl4、D-Gal、ANIT对化学性肝损伤小鼠血清生化指标的影响.世界华人消化杂志，1998，6（1）：19-21.
3 张照兰，郭胜，郭勇义.退黄合剂对 ANIT诱发肝内胆汁瘀积大鼠的影响.中国中医药信息杂志，2004，11（12）：1052-1053.