小鼠生精相关基因pQE/Dnajb13重组载体的构建和蛋白表达

来源 :南方医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：dlfb

【摘要】

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目的：利用分子克隆技术构建重组表达载体pQE/Dnajb13，在大肠埃希菌中高效表达、鉴定并纯化。方法应用RT-PCR技术，以小鼠睾丸cDNA文库为模板扩增Dnajb13基因全长开放阅读框，将其连

【作者】

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朱莉刘刚

【机构】

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中南大学生殖与干细胞工程研究所

【出处】

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南方医科大学学报

【发表日期】

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2013年12期

【关键词】

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Dnajb13 Dnajb蛋白蛋白表达精子发生 Dnajb13 Dnajb protein protein expression spermatogenes

【基金项目】

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国家自然科学基金（81070531）

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目的：利用分子克隆技术构建重组表达载体pQE/Dnajb13，在大肠埃希菌中高效表达、鉴定并纯化。方法应用RT-PCR技术，以小鼠睾丸cDNA文库为模板扩增Dnajb13基因全长开放阅读框，将其连接到pQE载体后测序鉴定；将重组质粒转入宿主菌E.coli M15，经IPTG诱导表达His/Dnajb13融合蛋白，Ni2＋亲和层析纯化融合蛋白，采用SDS-PAGE和Western blotting对融合蛋白进行分析和鉴定。结果成功构建了pQE/Dnajb13重组质粒，测序结果与预期一致；转化重组质粒的E.c

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