【摘 要】
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目的 研究骨髓基质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)起搏电流基因的表达及转染人超极化激活的环化核苷酸门控通道(hyperpolarization-activated eyclic-nucleotide gated
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目的 研究骨髓基质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)起搏电流基因的表达及转染人超极化激活的环化核苷酸门控通道(hyperpolarization-activated eyclic-nucleotide gated,HCN)亚型2后起搏电流的特点.方法 通过实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chainreaction,real-time PCR)的方法,检测MSCs本身起搏电流基因的表达.用脂质体转染的方法,将重组有编码起搏电流基因的质粒pcDNA3-hHCN2导入MSCs中,用全细胞膜片钳技术记录起搏电流(IhHCN2);用real-time PCR和Western blot印迹检测目的基因hHCN2的mRNA和蛋白表达.结果 MSCs起搏电流基因mHCN1、mHCN2、mHCN3、mHCN4在总HCN的表达中所占比例分别为(0.08±0.01)%、(77.16±0.03)%、(0.24±0.01)%、(22.53±0.02)%.全细胞膜片钳技术记录到IhHCN2,得到电流密度-电压曲线,其激活电压约为-80 mV,此电流可以被4 mmol/L的Cs+阻断.real-timePCR检测有hHCN2 mRNA的高表达,Western blot印迹检测有其蛋白的表达.结论 (1)MSCs起搏电流基因表达以mHCN2和mHCN4为主;(2)通过脂质体转染法使MSCs成功表达IhHCN2起搏电流,为抗心律失常基因治疗的研究奠定了基础.
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