【摘 要】
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用RT-PCR扩增出禽流感病毒A/chicken/Jiangsu/08/02(H9N2)株核蛋白(NP)基因,首先克隆到pGEM-T easy载体,再亚克隆到转座载体pFastBacl,最后将含有禽流感病毒核蛋白基因的表达
【机 构】
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农业部动物检疫所国家外来动物疫病诊断中心(青岛)
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用RT-PCR扩增出禽流感病毒A/chicken/Jiangsu/08/02(H9N2)株核蛋白(NP)基因,首先克隆到pGEM-T easy载体,再亚克隆到转座载体pFastBacl,最后将含有禽流感病毒核蛋白基因的表达盒转座到穿梭载体Bacmid中.重组质粒转染Sf9细胞,获得了重组杆状病毒reBac-N,经扩增后重组杆状病毒的滴度达到5×10<8>pfu/ml,以10个MOI的reBac-N感染Sf9细胞,经SDS-PAGE、Western blot和琼脂扩散(AGID)试验,结果可见核蛋白以非分泌、可溶性方式表达,且感染后72小时表达量最高,分子量约56kDa,与天然核蛋白大小一致.琼脂扩散试验还表明,重组核蛋白具有良好的抗原性,且高度特异,可取代常规全病毒琼扩抗原,用于禽流感抗体检测.
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