【摘 要】
：
目的：探讨人表皮干细胞体外分离、培养和鉴定的技术方法,为组织工程皮肤的构建提供种子细胞.方法：用DispaseII酶和胰蛋白酶两步法分离出角朊细胞和成纤维细胞,并制备改良的表皮干细胞培养基,置培养箱内培养分离的角朊细胞片,37C,静置lOmin,留用贴壁细胞,Ⅳ型胶原快速粘附法富集分离继续培养,所得细胞分别以能否呈克隆状生长,β1整合素、角蛋白19(K19)免疫细胞化学染色进行鉴定。结果：人胎盘Ⅳ
【机 构】
：
温州医学院附属第一医院烧伤科,温州,325000 南昌大学附属第一医院烧伤科,南昌,330006
【出 处】
：
第四届华东六省一市整形外科学术会议暨2007年浙江省整形、美容学术会议
论文部分内容阅读
目的：探讨人表皮干细胞体外分离、培养和鉴定的技术方法,为组织工程皮肤的构建提供种子细胞.
方法：用DispaseII酶和胰蛋白酶两步法分离出角朊细胞和成纤维细胞,并制备改良的表皮干细胞培养基,置培养箱内培养分离的角朊细胞片,37C,静置lOmin,留用贴壁细胞,Ⅳ型胶原快速粘附法富集分离继续培养,所得细胞分别以能否呈克隆状生长,β1整合素、角蛋白19(K19)免疫细胞化学染色进行鉴定。
结果：人胎盘Ⅳ型胶原包被的培养瓶内快速贴壁细胞继续培养24 h后细胞呈克隆状生长；β1整合素、Kl9免疫细胞化学染色呈阳性。
结论：人表皮干细胞在体外成功得到分离与培养,为其体外的大量扩增奠定了基础。
其他文献
《内经》中以《素问》的《脉要精微论》、《平人气象论》和《经脉别论》等篇为基础,集中阐述了脉象与四时的关系和脉诊的重要性以及平脉、病脉、死脉的具体形象和诊断,从而开拓了后世脉学发展的道路。因此研究《内经》中的脉诊对于提高中医学的诊断水平是十分重要的。本文主要就《黄帝内经》中《脉要精微论》和《平人气象论》所论及的脉诊,从脉诊意义、诊脉环境、脉象与四时等几个方面进行分析。
余习读《黄帝内经素问·至真要大论》其深刻之论述很值得玩味,将理论与临床相联系,往往豁然开朗,疑惑冰释,而得意外之收获。《素问·至真要大论》中有关病机十九条之论述,所论病机的概念、病机的内容及病机的意义是中医理论体系的重要组成部分。经文列举了诸多症状并归属其病机,指出疾病类型与五脏、六气的关系,以此做为分析证候、审察病机的范例。本文对《内经》札记中一例病例进行了分析。
《金匮要略·黄疸病脉证并治第十五》第1条云：“寸口脉浮而缓,浮则为风,缓则为痹,痹非中风,四肢苦烦,脾色必黄,瘀热以行。”本条论述湿热黄疸的病机几成定论,然如何理解文中“风、痹、瘀热”的含义?二者在黄疸发病中的地位如何?对此教材释义简略,学生难于理解,成为本科教学中的难点之一,笔者结合历代注家观点对此加以论之。本文介绍了注家观点，阐述了“风”、“痹”、“淤热”与黄疸发病的关系。
温,言疾病的性质；疫,指疾病的流行。《说文解字》云：“疫,民皆疾也”。温疫是指温病中具有强烈传染性和流行性的一类疾病。温疫学派是以温疫立论来研究其发生发展、防治规律的一大学派。其理论与治疗经验对于温疫的防治具有重要的学术价值,特别是去年SARS的突然袭击,使人们认识到深入挖掘研究温疫学派学术思想的必要性和迫切性。本文介绍了瘟疫学派学术思想对疫病特征的认识，阐述了其治疗特色。
目的：比较糖尿病患者的溃疡创面中血管化程度和促血管化生长因子的表达与非糖尿病患者的皮肤创面组织中有何差异,探讨糖尿病患者创面难愈机制。材料和方法：分别采集糖尿病患者的皮肤溃疡组织和非糖尿病患者的皮肤创伤组织,进行组织块培养,用ELISA技术分别对创面组织释放的FGF-2、VEGF进行检测；采用免疫组织化学技术对创面组织中CD31抗原表达进行检测,以了解微血管密度的改变。人脐带静脉内皮细胞分别在5m
目的：探讨以医用多孔高密度聚乙烯(HDPE)为内支撑外裹聚羟基乙酸(PGA)的支架,接种软骨细胞后,于体内构建MEDPOR-软骨复合体的可能性。方法：实验组:以直径3mm的MEDPOR外裹2mmPGA为支架,接种新生猪关节软骨细胞(5×107/ml),经体外培养2周及裸鼠皮下移植6周后取材,行大体观察、组织学、组织化学及免疫组化检测；PGA对照组:以直径8mm的单一PGA为支架,细胞接种与培养同实
目的：探讨内毒素预处理对单个核细胞分泌TNF-α、iNOS和NO的影响。方法：体外培养大鼠单个核细胞,内毒素预处理采用脂多糖0.1μg/ml孵育24小时,然后用2μg/ml LPS刺激24小时,设空白对照组(DMEM)和内毒素对照组(LPS 2μg/ml)。酶联免疫法测定培养液上清TNF-α浓度,分光光度法测定iNOS活性和NO含量。结果：内毒素预处理组单个核细胞培养液上清iNOS活性、TNF-α
目的：通过对糖尿病创面愈合过程中炎症细胞和单核巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)的变化特征研究,分析炎症细胞和GMCSF变化在糖尿病创面延迟愈合中的作用。方法：取C57BL/6小鼠共70只,分为正常组(WT组,n=35)和糖尿病组(DM组,用STZ法制作小鼠糖尿病模型,n=35)。麻腹腔醉后在背部中线两侧各制作0.8×0.gcm大小创面.伤后动态创面摄像并取创面标本.通过计算机图像处理系统计算创面
目的：建立分离培养人真皮淋巴管内皮细胞(LEC)及冷冻保存技术,为淋巴管内皮细胞相关研究提供方便.方法：采用中性蛋白酶及胶原酶消化结合免疫磁珠方法分选LEC,所获内皮细胞体外培养,经免疫荧光染色、RT-PCR及流式细胞仪鉴定分析；采用梯度降温法,冻存内皮细胞,经复苏后,进行形态学检查,以台酚蓝试验、四氮唑盐(MTT)试验、流式细胞术细胞检测等方法鉴定细胞生物特性。结果：中性蛋白酶及胶原酶消化方法结
目的：探讨应用小干扰RNA(siRNA)特异性抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞内Smad3基因表达,筛选高效特异性siRNA.方法：根据siRNA设计原则,针对人Smad3基因序列特征设计Smad3特异siRNA(1-3),转染瘢痕疙瘩成纤维细胞；RT-PCR、Westen-blot检测siRNA对Smad3基因的抑制效果。结果：Smad3 siRNA-3可有效抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中Smad3基因的表达