【摘 要】
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本实验利用SYBR GreenⅠ荧光定量技术建立一种相对定量检测猪谷氧还蛋白1(GLRX1)的方法。针对猪GLRX1设计对特异性引物,将PCR扩增的片段分别连接到T-easy载体上构建重组质粒,
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本实验利用SYBR GreenⅠ荧光定量技术建立一种相对定量检测猪谷氧还蛋白1(GLRX1)的方法。针对猪GLRX1设计对特异性引物,将PCR扩增的片段分别连接到T-easy载体上构建重组质粒,经筛选、鉴定纯化后,倍比稀释作为质控样品,用于实时荧光定量PCR中GLRX1标准曲线的构建,并进行反应的灵敏性、特异性和重复性试验。结果显示标准曲线线性关系R2值均在0.99以上;特异性结果表明的只能检测到猪GLRX1扩增曲线;批内和批间重复性试验的变异系数均小于0.5%。利用本方法检测临床样品,各组织间GLRX1表达量有差异,。本研究初步建立了检测猪GLRX1基因的SYBR Green荧光定量RT-PCR的方法,为后续对猪传染性疾病与猪GLRX1之间相互关系的研究提供了一种特异、灵敏的检测方法。
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