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目的制备标准化小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型(Reovirus 3,Reo-3)的免疫血清,建立小鼠Reo-3抗体ELISA检测方法。方法使用动物来源的Reo-3病毒感染BALB/c小鼠,获得高效价免疫血清;以BHK-21细胞制备Reo-3病毒抗原,并做正常抗原对照,滴定抗原和标准化小鼠Reo-3血清的最佳工作浓度,并进行特异性、敏感性、重复性、稳定性等实验。结果制备18mL抗Reo-3血清,经检测,IFA效价达1:640,IEA效价达1:160;Reo-3抗原和标准化小鼠Reo-3免疫血清最佳工作浓度分别为5ug/mL和1:2,400;该ELISA检测体系Reo-3特异抗原批内变异系数为3.8%,批间变异系数为4.0%;检测灵敏度为1:4400;与仙台病毒(SV)、小鼠肝炎病毒(MHV)、小鼠腺病毒(Mad)、痘苗病毒(Vaccinia Virus)、小鼠多瘤病毒(POLY)均无交叉反应。经37℃破坏性试验,2d稳定性试验相对偏差<27%。结论本研究制备的Reo-3抗血清达到同批次大量高滴度的水平,可作为检测实验小鼠Reo-3病原的标准化质控血清。本研究建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强。该体系可用于大、小鼠等实验动物Reo-3抗体的检测。