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目的：通过观察TGF-β1对于人皮肤成纤维细胞表型转化的作用是否受到RhoA/Rho激酶信号通路的影响,以探究该通路是否参与了人皮肤成纤维细胞的表型转化.
方法：原代培养人皮肤成纤维细胞,将第4代细胞用TGF-β1(10ng/ml)刺激后,分不同作用时间(0、3、6、24h)提取细胞内总蛋白.BCA法测定总蛋白浓度,western-blot检测α-SMA的表达水平;并用相同的方法检测不同浓度TGF-β1(0、2、10、50 ng/ml)刺激人皮肤成纤维细胞后α-SMA的表达水平.用RhoA/Rho激酶信号通路阻断剂Y-27632处理后,再用TGF-β1刺激,作为实验组,将未作处理的正常细胞作为空白对照组,Y-27632 (10umol/L)组作为阴性对照组,只用TGF-β1(10ng/ml)刺激组作为阳性对照组,分别检测α-SMA的表达差异.使用ANOVA对蛋白表达量进行统计学分析,P＜0.05为差异有统计学意义.
结果：10ng/ml TGF-β1按不同作用时间刺激人皮肤成纤维细胞后,α-SMA的表达量分别为:0h为1.0,3h为1.9±0.2、6h为2.1±0.1,24 h为3.1±0.1.24 h较其他3个时间点α-SMA表达量明显上升(n=4,P＜0.05).不同浓度TGF-β1刺激人皮肤成纤维细胞后,α-SMA的表达量分别为:0 ng/ml为1.0,2 ng/ml为1.4±0.2,10 ng/ml为3.2±0.1,50 ng/ml为3.1±0.2.10 ng/ml表达量明显高于0 ng/ml和2 ng/ml(n=4,P＜0.05),较50 ng/ml差异无统计学意义(n=4,P＞0.05).用Y-27632 (10 umol/L)处理后,再用TGF-β 1刺激,细胞的表型转化明显受到抑制,实验组α-SMA的表达量(1.2±0.2)较阳性对照组(2.9±0.1)明显降低(n=5,P＜0.05),与空白对照组(1.0)利阴性对照组(1.1±0.1)相比差异均无统计学意义(n=5,P＞0.05).
结论:RhoA/Rho激酶信号通路参与了TGF-β1诱导的人皮肤成纤维细胞表型转化过程.