兔球虫病严重危害养兔业的发展，病原为艾美耳属球虫。兔球虫生活史复杂，需在宿主消化系统内进行裂殖生殖和配子生殖，并在此过程中，递呈大量抗原至黏膜免疫系统，激发宿主产生强大的保护性免疫应答。因此，兔球虫具有作为载体将外源蛋白运送至肠道黏膜免疫系统的巨大优势。本研究基于转基因鸡球虫的操作平台，构建了一株共表达双报告基因(黄、红荧光蛋白)的转基因大型艾美耳球虫。利用药物筛选结合流式细胞分选的双筛选策略，获得了稳定表达外源蛋白的转基因群体(阳性率稳定在40％左右)。进一步的研究发现，转基因兔球虫表达的外源荧光蛋白在其裂殖生殖及配子生殖阶段均有表达，且黄、红荧光蛋白成功靶向虫体的不同部位。我们的研究证实，转基因鸡球虫调控外源蛋白表达的作用元件具备通用性，可应用于转基因兔球虫系统，为今后转基因兔球虫作为疫苗载体，预防兔球虫病及其他传染病的研究奠定基础。