【摘 要】
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目的 观察ERK1/2通路抑制剂U0126对肺动脉平滑肌细胞(PASMC)容量激活性氯离子通道(CIC3)表达的影响,探讨ERK1/2对PASMC容量激活性氯离子通道的作用和机制.方法 麻醉处死,在无菌条件下分离雄性SD大鼠肺动脉平滑肌,采用分次酶消化法获取大鼠PASMC进行原代培养.取第2代细胞采用小鼠抗大鼠SM α肌动蛋白免疫荧光细胞化学法进行细胞鉴定.取第4至5代细胞,用无血清培养基培养24
【机 构】
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浙江省医学科学院卫生学研究所毒理研究室,浙江杭州310013
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目的 观察ERK1/2通路抑制剂U0126对肺动脉平滑肌细胞(PASMC)容量激活性氯离子通道(CIC3)表达的影响,探讨ERK1/2对PASMC容量激活性氯离子通道的作用和机制.方法 麻醉处死,在无菌条件下分离雄性SD大鼠肺动脉平滑肌,采用分次酶消化法获取大鼠PASMC进行原代培养.取第2代细胞采用小鼠抗大鼠SM α肌动蛋白免疫荧光细胞化学法进行细胞鉴定.取第4至5代细胞,用无血清培养基培养24 h去血清同步化后随机分成3组：对照组、DMSO组、U0126组.继续在常氧(37℃、5％CO2,21％O2)条件下孵育48 h之后收集细胞,采用免疫印迹法检测CIC3蛋白和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)蛋白的表达,半定量逆转录-聚合酶链反应技术检测CIC3mRNA和细胞外信号调节激酶1(ERK1) mRNA的表达的表达.结果 与对照组比较,DMSO组CIC3 mRNA和蛋白的表达量轻微上调,pERK及ERK1 mRNA的含量也略微增加,但两组差异无统计学意义；U0126组CIC3蛋白表达量显著上调(P＜0.05),CIC3 mRNA表达量显著上调(P＜0.01),pERK及ERK1 mRNA含量明显低于对照组(P＜0.05).结论 U0126能降低容量激活性氯离子通道的表达,其机制可能与ERK信号途径受抑制有关.
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