【摘 要】
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通过与弓形虫等其他顶复亚门原虫进行比较分析,锚定新孢子虫的MIC6、MIC7、MIC 11展开研究.根据ToxoDB数据库中已登录的NCLIV_061760、NCLIV_025710、NCLIV_020720三个基因序
【机 构】
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中国农业大学动物医学院,北京市海淀区圆明园西路2号,100193
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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通过与弓形虫等其他顶复亚门原虫进行比较分析,锚定新孢子虫的MIC6、MIC7、MIC 11展开研究.根据ToxoDB数据库中已登录的NCLIV_061760、NCLIV_025710、NCLIV_020720三个基因序列,设计特异性引物.提取Nc-l株的DNA或RNA,扩增新孢子虫MIC6、MIC7、MICll基因,序列分析发现:MIC6基因全长984bp,编码327个氨基酸,分子量约为34kDa,无明显信号肽,含有一个跨膜区和两个表皮生长因子样结构域；MIC7基因全长4512bp,开放阅读框为1023bp,编码340个氨基酸,分子量约为36kDa,无信号肽,有一个跨膜区和四个表皮生长因子样结构域；MIC11基因全长963bp,开放阅读框为612bp,编码203个氨基酸,分子量约为22kDa,有一个明显的信号肽,无跨膜区.将MIC6基因插入pET28a,MIC7、MIC11基因插入pGEX4T-1,构建原核表达载体,诱导表达,分析、纯化蛋白,所获得的MIC6、MIC7、MIC 11重组蛋白分子量分别约为45kDa、60kDa和40kDa.分别以重组蛋白免疫Balb/c小鼠和新西兰大白兔,制备鼠源和兔源多抗血清,Western Blot检测发现多抗血清均能与新孢子虫全虫抗原发生反应.间接免疫荧光检测发现细胞内虫体的MIC6、MIC7和MIC11均定位在虫体前端,呈弥散性分布；而游离新孢子虫的MIC6、MIC7和MIC11都均匀分布于虫体表面.三种MIC蛋白在细胞内外均与MIC3共定位.本研究首次报道新孢子虫MIC6、MIC7、MIC11的基因序列,并对三种蛋白在细胞内、外的虫体的表达和定位进行了初步研究,为进一步研究其功能奠定基础.
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