为了高效制备裂殖壶菌抗氧化活性短肽,对裂殖壶菌粕中提取的裂殖壶菌蛋白采用分步酶解法。以DPPH自由基清除率为主要指标,水解度DH为次要指标,研究酶解时间、底物浓度、pH及酶添加量对酶解制备裂殖壶菌抗氧化肽的影响。选用碱性蛋白酶Alcalase和复合风味蛋白酶依次对裂殖壶菌蛋白进行酶解。结果显示,第一步碱性蛋白酶的最佳酶解条件为酶解时间6.00 h,pH9.00,底物浓度为2.0%,温度50℃,酶添加量为8.0%,此时DPPH自由基清除率和水解度分别为44.10%,5.33%;第二步复合风味蛋白酶的最佳酶解条件为酶解时间8.75 h,pH 6.71,温度50℃,酶添加量为12.60%,此时DPPH自由基清除率和水解度分别为58.06%,21.48%。分步酶解制备的裂殖壶菌抗氧化活性肽对DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基的半数清除浓度分别为0.50 mg/mL、35.20μg/mL、3.00 mg/mL。