5'-氮杂-2'-脱氧胞苷对HT-29和LoVo结直肠癌细胞株中CDX2基因基化状态、mRNA表达及蛋白表达的影响

来源 :第十四届全军诊断病理、第八届全军病理技术及第十一届北方四战区病理学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhaomohans
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  目的:探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中CDX2基因甲基化水平、mRNA及蛋白表达的影响.方法:用不同浓度5-Aza-CdR处理结直肠癌细胞株HT-29和LoVo.应用TaqMan探针为基础的实时定量PCR(Methylight)方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验(Western blot)检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中CDX2基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达.结果:Methylight检测HT-29和LoVo细胞中CDX2蛋白在药物作用异常甲基化未得到逆转;实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5μM 5-Aza-CdR处理后CDX2基因mRNA和蛋白重新表达,实时荧光定量PCR检测对照组和不同浓度实验组在HT-29细胞株mRNA相对表达量分别为(1.000±0.000),(0.973±0.024),(1.014±0.019)和(1.094±0.020);在LoVo细胞株相对表达量分别为(1.000±0.000),(0.966±0.038),(1.050±0.029)和(1.007±0.019).Western blot检测CDX2蛋白在对照组和不同浓度实验组中HT-29细胞株相对表达量分别为(0.454±0.049),(0.501±0.041),(0.340±0.050)和(0.531±0.046);LoVo细胞株相对表达量分别为(0.527±0.037),(0.415±0.037),(0.432±0.040)和(0.626±0.046).以上作用无时间、剂量依赖性,但CDX2基因mRNA在HT-29细胞株表达(F=25.146,P=0.000)和LoVo细胞株表达(F=5.470,P=0.024)具有统计学差异,CDX2蛋白表达在HT-29细胞株表达(F=9.700,P=0.005)和LoVo细胞株表达(F=17.701,P=0.001)亦具有统计学差异.结论:结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中CDX2基因mRNA和蛋白表达不受中DNA甲基化的表观遗传修饰的调控.
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