microRNA对TGEV诱导的IPEC-J2线粒体损伤的调控作用及机制

来源 :中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九届全国会员代表大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luochengshabi
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  目的:猪传染性胃肠炎(Transmissible Gastroenteritis,TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible Gastroenteritis Virus,TGEV)引起的一种猪的急性、高度接触性传染病,以2 周龄以内仔猪的致死性腹泻为特征,病死率可达100%.TGEV 能在体外培养的小肠黏膜上皮细胞(IPEC-J2)中复制增殖,引起细胞线粒体损伤,而microRNA 在此过程中的作用及机制尚未见报道,本研究拟确定在TGEV 诱导线粒体损伤过程中起调控作用的microRNA 及其作用机制.材料方法:本研究以TGEV 感染IPEC-J2,通过高通量测序研究TGEV 对细胞中miRNA 表达谱的影响,采用生物信息学技术预测与线粒体相关的差异表达microRNA 及其靶基因;并进一步通过real-time PCR 技术验证测序结果,通过双荧光素酶试验、western blotting 验证microRNA 靶基因,通过流式细胞仪,共聚焦显微镜,多功能微孔板检测仪等检测差异表达的microRNA 对TGEV 诱导的线粒体损伤的作用,并通过microRNA 靶基因阐明microRNA 对TGEV 诱导的IPEC-J2 线粒体损伤的调控机制.结果:高通量测序结果显示TGEV 诱导IPEC-J2线粒体损伤过程中有65 个microRNA 的表达量发生了改变,其中46 个microRNA表达量上调,19 个microRNA 表达量下调;通过对差异表达microRNA 预测靶基因的GO 及KEGG 富集分析,筛选出13 个与线粒体相关microRNA;采用real-time PCR 技术验证13 个差异表达microRNA 表达量结果均与测序结果一致;JC-1 线粒体膜电位检测以及细胞内ROS 水平检测显示miR-22 对TGEV 诱导的线粒体损伤有促进作用;双荧光素酶试验及western blotting 显示HK2 确为miR-22靶基因;过表达及抑制HK2 同时检测JC-1 线粒体膜电位以及细胞内ROS 水平均显示HK2 对TGEV 诱导的IPEC-J2 线粒体损伤具有抑制作用.结论:上述结果表明,TGEV 感染IPEC-J2 后,miR-22 通过与其靶基因HK2 的3'UTR 区结合,抑制HK2 翻译过程,进一步促进TGEV 所诱导的线粒体损伤.
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