【摘 要】
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夜来香花叶病毒（Telosma mosaic virus,TeMV）为正义ssRNA,Potyvirus病毒,粒体呈线状,侵染百香果主要引起花叶症状。传播媒介目前尚未明确。广西百香果病毒病发生重、蔓延快,严重影响百香果产量和品质,其中TeMV的发生频率最高。本研究根据百香果TeMV外壳蛋白的保守序列设计引物建立RT-qPCR检测体系,为该病毒在百香果中的含量测定奠定基础,为百香果健康种苗繁育和综合
【机 构】
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中国植物病理学会2019年学术年会论文集
【出 处】
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中国植物病理学会2019年学术年会论文集
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夜来香花叶病毒（Telosma mosaic virus,TeMV）为正义ssRNA,Potyvirus病毒,粒体呈线状,侵染百香果主要引起花叶症状。传播媒介目前尚未明确。广西百香果病毒病发生重、蔓延快,严重影响百香果产量和品质,其中TeMV的发生频率最高。本研究根据百香果TeMV外壳蛋白的保守序列设计引物建立RT-qPCR检测体系,为该病毒在百香果中的含量测定奠定基础,为百香果健康种苗繁育和综合防控提供技术支撑。利用重组质粒TeMV-1作为标准品建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量方法。针对引物浓度、退火温度、灵敏度、特异性、重复性和稳定性等进行条件优化。试验结果:熔解曲线为单一峰,说明所用引物扩增效果好,特异性强,无非特异性扩增;引物在终浓度为400nmol/mL时Ct值最小为19.61,且荧光信号最强,为最适引物浓度;引物在51℃时Ct值最小为14.24,且荧光信号最强,为最适退火温度;重组质粒TeMV-1的浓度为2.485×1010 copies/μL,选取2.485×（10~5～109） copies/μL进行梯度稀释建立的标准曲线方程为:y=-4.427log （x）+38.12,R~2=0.999,标准曲线中样品的Ct值与浓度的Log值呈良好的线性关系;常规PCR只能检测到2.485×10~5 copies/μL,而RT-qPCR能够检测到2.485×10~3 copies/μL,RT-qPCR比常规PCR检测的灵敏度高100倍。且RT-qPCR方法具有良好的重复性和稳定性。本研究建立的基于SYBR GreenⅠ的RT-qPCR技术用于检测TeMV,具有特异性强、速度快、灵敏度高、重复性好等特点,适合用于检测TeMV在百香果中的含量等研究。
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