论文部分内容阅读
[目的]脂多糖(LPS),是革兰氏阴性菌细胞壁最外层的主要组成成分,常被用来建立动物的免疫应激模型。黄芩苷是中药黄芩的主要活性成分,具有抗菌、抗炎和抗氧化等作用。本试验通过转录组测序技术,探讨脂多糖诱导血管内皮细胞转lncRNA表达的变化。[方法]试验设空白对照组、LPS模型组、黄芩苷药物处理组。消化血管内皮细胞,重悬于含10%胎牛血清的M-199细胞培养基中。每个单孔板中加入2 mL细胞悬浮液,每个单孔板细胞数量在1×10~6左右。药物处理组加入1000μL/mL的黄芩苷250μL,预处理2h。LPS模型组和药物处理组加入10μg/mL的LPS溶液250μL,刺激1h。收集细胞,提取RNA后,利用Illumina Hiseq2000平台进行测序。[结果]结果表明,脂多糖刺激血管内皮细胞后,差异表达基因有186个(倍数变化≥2,p<0.05),其中上调表达基因有148个,下调表达基因有38个。有60个lncRNAs的表达发生显著改变(倍数变化≥2,p<0.05),其中53个上调表达,7个下调表达(倍数变化≥2,p<0.05)。经过黄芩苷处理后,差异表达基因有17个(倍数变化≥2,p<0.05),其中上调表达基因有12个,下调表达基因有5个。发现有5个lncRNAs的表达发生显著改变(倍数变化≥2,p<0.05),其中3个上调表达,2个下调表达。进一步分析表明,在转录组水平,脂多糖诱导猪血管内皮细胞后,肿瘤坏死因子信号通路、Toll样受体信号通路、NF-κB信号通路、NOD样受体信号通路和趋化因子信号通路的基因表达发生变化。黄芩苷可以显著影响HMOX1、CYP1A1和CCL5等基因的表达,从而抑制肿瘤坏死因子信号通路、Toll样受体信号通路、NOD样受体信号通路、趋化因子信号通路,并增强代谢相关信号通路来作用于脂多糖诱导的血管内皮细胞炎症反应。脂多糖刺激血管内皮细胞后,影响lncRNAs的表达变化,导致其CFLAR、TAB3和DDX58等靶基因对应的肿瘤坏死因子信号通路、NF-κB信号通路和半乳糖代谢等信号通路发生明显的改变。黄芩苷可以显著的影响lncRNAs的表达,从而作用于对应靶基因所参与的信号通路,抑制肿瘤坏死因子信号通路、半乳糖代谢、NF-κB信号通路等信号通路来改变脂多糖诱导的炎症反应。[结论]黄芩苷能够改变脂多糖所诱导仔猪血管内皮细胞的炎症反应,这为防治脂多糖引起的急性炎症反应提供一种新的思路。