甘蓝型油菜开花调控转录因子CONSTANS基因功能初步研究

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CONSTANS基因(CO基因)作为开花调控途径——光周期途径中的关键转录调控因子,在调控植物开花上具有重要作用。本研究根据NCBI上已知的甘蓝型油菜CONSTANS基因序列设计全长扩增引物(CO-F:CGGATGTTCAAACAAGAGAGTAACAAC;CO-R:CGTTATTTTTGGCCATAGAATGAAGG)克隆目的基因。对目的基因片段测序并进行酶切位点分析,设计带酶切位点引物(F-primer:CGGATCCATGTTCAAACAAGAGAGTAACAACA,含BamHⅠ位点;R-primer:CGAGCTCTTATTTTTGGCCATAGAATGAAGGA,含ScaⅠ位点)。利用片段两端的粘性末端酶切位点BamHⅠ和SacⅠ将cDNA片段连接在真核表达载体pBI121上,通过PCR鉴定,结果表明pBI121+CONSTANS过表达载体已成功构建。将过表达载体转化感受态EHA105细胞,通过拟南芥花序侵染获得3株阳性植株,经过纯化培养获得T3阳性植株。将转基因阳性拟南芥和野生型(CK)拟南芥种子在4℃条件下春化3d,播种在6cm×6cm×7cm的盆中,所有材料放置在BINDER人工气候箱中,温度25℃,湿度60%,长日照条件(16h光照和8h黑暗),记载第一朵花开花时间,之后每天记载开花株数,直至全部植株开完花。结果表明:在长日照条件下,转基因植株较野生型植株在开花时间上提前3~6d,说明在长日照条件下CO基因在调控甘蓝型油菜开花上具有促进作用。
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