【摘 要】
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目的:建立灵敏、稳定、专一性强的荧光定量PCR方法,用于对戊型肝炎病毒的定量检测.
方法:针对国内流行的戊型肝炎病毒株序列,选择位于ORF2的保守区域设计引物和Taqman探
【机 构】
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浙江省医学科学院生物工程研究所,杭州,310013
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目的:建立灵敏、稳定、专一性强的荧光定量PCR方法,用于对戊型肝炎病毒的定量检测.
方法:针对国内流行的戊型肝炎病毒株序列,选择位于ORF2的保守区域设计引物和Taqman探针.以克隆有目的扩增片段的重组质粒pET28a-ORF23为定量标准品,建立荧光定量PCR方法.
结果:HEV定量检测的灵敏度为5个拷贝每个反应,定量的线性范围达5×(100～108)9个数量级.批内重复性检测,其变异系数为1.49％;批间重复性检测,其变异系数为1.98％和2.23％.对3份阳性标本的定量结果分别为:3.8×102、5.4×102和1.1×103 copies/mg,3份健康标本以及1份甲型肝炎病毒标本均无扩增信号.
结论:建立的荧光定量PCR方法具有灵敏度高、稳定性好、特异性强等特点,适用于HEV的定量检测。
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