【摘 要】
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目的 将OA软骨细胞和干细胞进行共培养,通过细胞间相互作用,促进OA软骨细胞表型的恢复及干细胞向软骨细胞分化.方法 将人OA软骨细胞(hOAACs)和人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)、人膝关节髌下脂肪垫干细胞(hIPFPs)分别进行二维、pellet共培养,诱导21天后分别对共培养组(hOAACs+hBMSCs、 hOAACs+hIPFPs)及单独组细胞进行H&E染色、阿尔新蓝染色、免疫荧光染色
【出 处】
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中华医学会第十八届骨科学术会议暨第十一届COA国际学术大会
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目的 将OA软骨细胞和干细胞进行共培养,通过细胞间相互作用,促进OA软骨细胞表型的恢复及干细胞向软骨细胞分化.方法 将人OA软骨细胞(hOAACs)和人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)、人膝关节髌下脂肪垫干细胞(hIPFPs)分别进行二维、pellet共培养,诱导21天后分别对共培养组(hOAACs+hBMSCs、 hOAACs+hIPFPs)及单独组细胞进行H&E染色、阿尔新蓝染色、免疫荧光染色及RT-PCR,分析各组细胞软骨表型的差异.结果：1.H&E染色发现,二维共培养组细胞聚集,细胞呈圆形、核染色较深；单独hBMSCs及单独hIPFPs组细胞呈扁平状,核染色较浅；单独hOAACs组细胞呈不规则形,核染色较深；pellet共培养组细胞呈圆形,接近正常软骨细胞形态,核深染；单独hBMSCs及单独hIPFPs组细胞呈不规则的圆形、扁圆形,核染色较深；单独hOAACs组细胞分散,呈不规则状,核染色较深；2.阿尔新蓝染色显示,二维共培养组染色较深,单独hBMSCs及单独hIPFPs组染色较浅,单独hOAACs组染色偏中；pellet共培养组明显深染,单独hBMSCs及单独hIPFPs组染色较深,单独hOAACs组,染色较浅且分散；3.免疫荧光染色显示,二维共培养组COLⅡ及Aggrecan染色较深,COLⅠ及COLⅩ染色较浅；单独hBMSCs及单独hIPFPs组细胞COLⅡ、COLⅩ及Aggrecan染色偏中,COLⅠ染色较深；单独hOAACs组细胞COLⅠ、 COLⅡ、及Aggrecan染色较浅,COLⅩ染色较深；pellet共培养组COLⅡ深染,Aggrecan染色较深,COLⅠ及COLⅩ染色较浅；单独hBMSCs及单独hIPFPs组细胞COLⅡ、COLⅩ及Aggrecan染色偏中,COLⅠ染色较深；单独hOAACs组细胞COLⅠ、COLⅡ、及Aggrecan染色较浅,COLⅩ染色较深；4.RT-PCR检测发现,二维共培养组COLⅡ及Aggrecan mRNA表达较多,COLⅠ及COLⅩ mRNA表达较少,同单独hBMSCs、单独hIPFPs组细及单独hOAACs组细胞相比,差异均有统计学意义(P＜0.05)；hOAACs+hIPFPs组同hOAACs+-hBMSCs组相比,COLⅡ及Aggrecan mRNA表达增多,COLⅠ及COLⅩ mRNA表达减少,差异无统计学意义(P＞0.05)；pellet共培养组COLⅡ及Aggrecan mRNA表达更多,COLⅠ及COLⅩ mRNA表达较少,同单独hBMSCs、单独hIPFPs组及单独hOAACs组相比,差异均有统计学意义(P＜0.01)；hOAACs+hIPFPs组同hOAACs+hBMSCs组相比,COLⅡ及Aggrecan mRNA表达更多,COLⅠ及COLⅩ mRNA表达更少,差异有统计学意义(P＜0.05)；pellet共培养组较二维共培养组COLⅡ及Aggrecan mRNA表达增多,COLⅠ及COLⅩ mRNA表达减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 hOAACs+hBMSCs、hOAACs+hIPFPs共培养有利于软骨表型的表达,pellet共培养优于二维共培养,且hOAACs+hIPFPs pellet共培养优于hOAACs+-hBMSCs.
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